細胞・遺伝子工学的手法によるカキの耐病・耐虫性品種の育成

利用细胞和基因工程技术开发抗病和抗虫牡蛎品种

基本信息

批准号：
07760029
负责人：
田尾龍太郎
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は遺伝子導入によりカキの耐病・耐虫性品種を作出することにあった.平成7年度の前半は,当初の研究実施計画に従って,アグロバクテリウム法によってセイヨウナシ由来のポリガラクツロナーゼインヒビター(PGIP)遺伝子とBT毒素遺伝子のカキへの組み込みを試みた.数回の形質転換実験を行ったところ,BT毒素遺伝子による形質転換体を得ることには成功したが,PGIP遺伝子による形質転換体を得ることは出来なかった.本研究の実施期間が1年であることからPGIP遺伝子による形質転換体の作出は断念し,年度の後半はBT毒素遺伝子を導入したカキの形質転換体の分析に終始した.セレクションマーカーに用いたカナマイシン耐性遺伝子が導入されたと考えられるカナマシン耐性個体について,カナマイシン耐性遺伝子と同時に組み込んだマーカー遺伝子であるGUS遺伝子の発現によるGUS活性を測定した.GUS活性の認められた系統について,さらにPCR法とサザン法により遺伝子導入の確認と詳細な解析を行った.引き続いて,ウエスタン法によりBT毒素タンパクのカキにおける生合成を確認した.耐虫性に関しては,Indianmeal mothの幼虫を用いた生物検定法により形質転換体における殺虫活性を確認した.以上の結果から,BT毒素遺伝子の導入によりカキの耐虫性品種の作出が可能であることが示された.なお本研究の結果は,日本園芸学会において口頭発表し,論文としてとりまとめアメリカ園芸学会誌に現在投稿中である.

本研究的目的是通过基因转移培育抗病、抗虫的柿子品种。 1995年上半年，按照原研究实施计划，采用农杆菌法培育梨源多聚半乳糖醛酸。酶抑制剂（PGIP）基因和BT毒素基因对牡蛎的影响经过多次转化实验，我们成功获得了带有BT毒素基因的转化体，但未能获得带有PGIP基因的转化体。本研究的实施时间为一年，我们放弃了利用BT毒素基因的转化体。 PGIP基因，和研究的后半部分集中于分析导入了BT毒素基因的牡蛎转化体，对于被认为导入了用作选择标记的卡那霉素抗性基因的牡蛎转化体，我们分析了卡那霉素抗性个体。使用与卡那霉素抗性基因同时引入的标记基因的个体表达某些GUS基因。使用牡蛎测量GUS活性。对于观察到GUS活性的品系，确认基因导入并使用PCR和Southern方法进行详细分析。随后，使用Western方法确定牡蛎中BT毒素蛋白的生物合成。抗虫性方面，印度餐通过使用蛾幼虫的生物测定方法证实了转化体的杀虫活性。上述结果表明，通过引入BT毒素基因创造抗虫牡蛎品种是可能的。该研究结果在日本口头报告。园艺学会，目前正在整理成一篇论文并提交给《美国园艺学会杂志》。