Discovery of the Prunus-specific self-incompatibility recognition system and its horticultural applications

李属特有的自交不亲和识别系统的发现及其园艺应用

基本信息

批准号：
19H00941
负责人：
田尾龍太郎
金额：
$ 28.87万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

（共通反応に関する仮説検証実験）昨年度に得られた結果の検証のため，異なるSハプロタイプ由来の組換えS-RNaseを用いた共免疫沈降実験を行ったところ，昨年度と同様にS-RNaseとMGSTの結合が確認されると同時にSFBとの結合も確認された．しかしながら，昨年度までの実験で検出されたDnaJ様タンパク質と同じタイプのDnaJ様タンパク質は検出されなかった．DnaJ様タンパク質は新たな共通因子候補であるため，この結果についてはさらに検証する必要がある．MGSTの立体構造をin silicoで検証したところ，チオレドキシン活性を持つ可能性が高いことを示唆する結果が得られた．（和合反応に関する仮説検証実験）S locus F-box likes（SLFLs）およびS haplotype-specific F box likes（SFBLs）によるS-RNaseのポリユビキチン化を様々な条件と実験手法により検討したが，現在までにS-RNaseのポリユビキチン化は見られていない．（不和合反応に関する仮説検証実験）昨年度に行った組み換えS-RNaseを用いたプルダウンアッセイで，雌ずい因子S-RNaseと花粉因子SFBの結合が初めて確認された．本年度，この検証のために異なるSハプロタイプの組み換えS-RNaseを用いた検証実験を行ったところ，昨年度と同様に自己特異的にS-RNaseとSFBが結合することが確認された．（組換え花粉を用いた証明実験）昨年度までの実験でデザインしたMGSTとSFBのアンチセンスオリゴを用いてin vitroおよびin vivoで両遺伝子のノックダウンにより不和合性反応の打破が認められたので，その結果を取り纏めて論文として発表した．

（关于共同反应的假设验证实验）为了验证去年获得的结果，我们使用来自不同S单倍型的重组S-RNase进行了免疫共沉淀实验，与去年一样，我们发现S-RNase和MGST处于相同状态。同时，还证实了与SFB的结合。然而，截至去年在实验中检测到的同类型DnaJ样蛋白并未检测到。由于DnaJ样蛋白是一个新的公因子候选蛋白，因此该结果需要进一步验证。当 MGST 的三维结构通过计算机验证时，结果表明它可能具有硫氧还蛋白活性。 (关于相容性反应的假设验证实验) 使用各种条件和实验方法研究了S基因座F盒样(SLFL)和S单倍型特异性F盒样(SFBL)对S-RNase的多泛素化没有S-RNase的多泛素化。观察到。 (关于不相容反应的假设验证实验) 在去年进行的使用重组S-RNase的pull-down测定中首次确认了雌蕊因子S-RNase和花粉因子SFB之间的结合。今年，为此，我们使用不同S单倍型的重组S-RNase进行了验证实验，证实S-RNase和SFB具有自身特异性结合，与去年类似。（使用重组花粉的验证实验）使用截至去年的实验设计的MGST和SFB反义寡核苷酸，在体外和体内观察到两种基因的敲低，以克服不相容反应，并将结果总结并发表为论文。