グリア細胞生存決定因子としてのグルタミントランスポーターに関する分子薬理学的研究

谷氨酰胺转运蛋白作为神经胶质细胞存活决定因素的分子药理学研究

基本信息

批准号：
07J05248
负责人：
小椋正人
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット大脳皮質由来培養アストログリア細胞には、神経細胞と同様にグルクミントランスポーター(GlnT)が機能的に発現すること、および、アデニル酸シクラーゼ活性化薬であるForskolin曝露に伴い、GlnTプロモーターの活性化を通して、GlnT mRNA発現およびGln輸送活性増強が出現することを以前に示した。さらに、GlnT過剰発現実験からGlnT mRNA発現増強はアストログリア細胞の酸化的ストレス脆弱性を惹起することが判明した。そこで、GlnTによるアストログリア細胞の酸化的ストレス脆弱性惹起メカニズム解明およびアストログリア細胞の機能変化が神経細胞死に与える影響を解析する目的で、GlnT安定発現C6 Glioma細胞株を作製した。まず、GlnT安定発現株においてHPLCを用いて細胞内Gln濃度を測定したところ、著明な細胞内Gln濃度の増加が観察された。さらに、過酸化水素曝露細胞死を検討したところ、PI陽性細胞数の増加が観察された。この時、GlnT抗体を用いた免疫染色法を行ったところ、GlnTたんぱく質は細胞膜上ではなく、細胞間接着面において局在性が観察され、さらに、ROS蛍光指示薬であるHydroethidineを用いてROS産生能を評価したところ、産生能はGlnT安定発現株において著明に増加していた。次に、グルタミン酸誘発性海馬神経細胞死に対するGlnT安定発現株のコンディション培地の影響を解析したところ、著明な回復効果が観察された。そこで、神経栄養因子発現量を解析したところGlnT安定発現株において、NGFおよびNT4/5mRNA発現量の著明な増加が観察された。以上の結果より、C6 Glioma細胞において、GlnTの安定発現は酸化的ストレス脆弱性を惹起すると共に、Glu誘発性神経細胞死に対しては神経栄養因子を介した防御作用を発揮する可能性が示唆された。

Glcmint转运蛋白（GLNT）在大脑皮层衍生的星形胶质细胞中的功能表达，并且由于Forskolin的暴露，GLNT启动子的振兴，腺苷的循环酶先前表明GLNT mRNA表达和GLN的转运活性活性。通过转换增加。此外，GLNT超过 - 肌体实验表明，GLNT mRNA表达增加会导致星形胶质细胞的氧化应激脆弱性。因此，创建了GLNT稳定的C6胶质瘤细胞的共享，目的是阐明Astroglial细胞通过GLNT氧化应激 - 胶合性 - 散布性的机制，以及Astroglian细胞对神经细胞死亡的功能的影响。首先，当使用HPLC在GLNT稳定表达应变中测量内GLN浓度时，观察到细胞GLN浓度的显着增加。此外，考虑到过氧化氢暴露细胞死亡时，观察到PI阳性细胞的增加。目前，使用GLNT抗体进行了免疫染色方法，并且GLNT蛋白不在细胞膜上，而是在细胞互连表面上观察到局部性质，并且使用ROS荧光指导药物的ROS产生能力，氢乙胺可以根据评估，在GLNT稳定表达菌株中的生产能力显着提高。接下来，观察到观察到谷氨酸稳定表达的状况分析谷氨酸引入水域的表达情况，并观察到了显着的恢复效应。因此，分析了神经营养因子表达的量，并观察到GLNT稳定的表达菌株的NGF和NT4/5MRNA表达显着增加。从上面的结果中，在C6胶质瘤细胞中，稳定的GLNT表达可能会导致氧化应激脆弱性，并通过GLU诱导的神经细胞死亡来证明防御效应。

项目成果

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Exacerbation of oxidative stress vulnerability through upregulation of a glutamine transporter in cultured rat astrocytes

通过上调培养的大鼠星形胶质细胞中谷氨酰胺转运蛋白加剧氧化应激脆弱性

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Masato Ogura;Hideo Taniura;Noritaka Nakamichi;Yukio Yoneda
通讯作者：
Yukio Yoneda

Activator protein-1 responsive to the group II metabotropic glutamate receptor subtype in association with intracellular calcium in cultured rat cortical neurons

DOI：
10.1016/j.neuint.2007.04.025
发表时间：
2007-12
期刊：
Neurochemistry International
影响因子：
4.2
作者：
Chie Sugiyama;N. Nakamichi;M. Ogura;Eriko Honda;S. Maeda;H. Taniura;Y. Yoneda
通讯作者：
Chie Sugiyama;N. Nakamichi;M. Ogura;Eriko Honda;S. Maeda;H. Taniura;Y. Yoneda

Upregulation of the glutamine transporter through transactivation mediated by cAMP/protein kinase A signals toward exacerbation of vulnerability to oxidative stress in rat neocortical astrocytes

通过 cAMP/蛋白激酶 A 介导的反式激活上调谷氨酰胺转运蛋白，加剧大鼠新皮质星形胶质细胞对氧化应激的脆弱性