酵素変換による高感度検出法を用いる微生物由来新規生理活性環状ジペプチド類の探索

使用基于酶转化的高灵敏度检测方法寻找源自微生物的新型生物活性环状二肽

基本信息

批准号：
07F07431
负责人：
神崎浩
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

放線菌Streptomycs albulus KO23株が生産する環状ジペプチド酸化酵素(CFLoxidase)が環状ジペプチドに対して,非常に幅広い特異性を示すこと,その反応生成物,脱水素型環状ジペプチドが特徴的なUVスペクトルを示すことから,酵素反応とDAD-HPLC法を組み合わせることで、環状ジペプチドを効率よく検出する方法を確立した。平成19年度の研究において,その検出法をより簡便で高感度にする手法へと改善し,平成20年度はこの方法を用いて,微生物および植物抽出物を探索源として環状ジペプチドの検索を行い,幾つかの抽出物中に酵素反応を受ける化合物の存在を認めた。今年度はまず,環状ジペプチドと予測される化合物の存在を認めた数種の糸状菌抽出物のうち,鰹節生産に用いられる糸状菌Aspergillus repensの培養抽出物から,目的化合物を単離し,脱水素型環状ジペプチドneoechinilin Aと同定した。さらにこの化合物を基質としたCFLoxidaseによる変換反応で得られるneoechinilin Bを単離した。これらの化合物の細胞分裂阻害活性を測定し,環状ジペプチド類の構造活性相関に関して新たな知見を得た。すなわち,これらの化合物に共通するTrp残基に置換しているイソプレニル基が,細胞分裂阻害活性の発現に重要であることが判明した。また,CFLoxidaseによる酵素反応を受ける化合物の存在を認めたマツ培養細胞抽出物から,目的化合物の単離精製に成功した。

放线菌Streptomycs albulus菌株KO23产生的环状二肽氧化酶（CFL氧化酶）对环状二肽表现出非常广泛的特异性，其反应产物脱氢环状二肽表现出特征性的紫外光谱。因此，我们建立了一种有效检测环状二肽的方法。结合酶促反应和DAD-HPLC方法制备环状二肽。在2007年的研究中，我们将检测方法改进为更简单、更灵敏的方法，并在2008年，我们使用该方法以微生物和植物提取物为搜索源来搜索环状二肽，观察到发生酶促反应的化合物的存在。在一些摘录中。今年，我们首先从用于生产干鲣鱼片的丝状真菌白曲霉的培养提取物中分离出目标化合物，并将其脱氢后鉴定为环状二肽新毛茛素A型。此外，分离出新毛菊素B，其是通过使用CFL氧化酶、使用该化合物作为底物的转化反应获得的。我们测量了这些化合物的细胞分裂抑制活性，并获得了有关环状二肽的构效关系的新知识。换句话说，发现这些化合物共有的Trp残基上取代的异戊二烯基对于细胞分裂抑制活性的表达是重要的。此外，我们成功地从松树培养细胞提取物中分离和纯化了目标化合物，其中检测到了通过CFL氧化酶进行酶促反应的化合物的存在。