肝オーバル細胞の発生・増殖・分化を制御する分子メカニズムの解析

控制肝卵圆细胞发育、增殖和分化的分子机制分析

基本信息

批准号：
07F07198
负责人：
宮島篤
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

肝臓が重篤な障害を受けた際に出現し、肝実質細胞と胆管上皮細胞への二方向性の分化能および高い増殖能を持つオーバル細胞は、成体肝臓における幹細胞と考えられており、また、肝臓癌の癌幹細胞となる可能性も示唆されている。しかし、オーバル細胞の性状や発生、増殖、分化のメカニズムは未だ殆ど明らかになっていない。本研究課題では、(1)オーバル細胞の起源と、その誘導に関わるシグナルを解明する、(2)オーバル細胞に特異的に発現するmiRNAとそれらのオーバル細胞の発生、増殖、分化における役割について解析することで、オーバル細胞の全体像を理解することを目的としている。上記の(1)について、オーバル細胞が胆管上皮細胞から由来する可能性を検討するため、胆管上皮細胞のマーカーであるCK19遺伝子のプロモーターの制御下でCre-ERT発現するトランスジェニックマウスの作製を行い、継続中である。このマウスとfloxedレポーターマウスを交配させて得られるマウスを用いて、胆管上皮細胞にのみレポーター遺伝子を発現させた状態でオーバル細胞を誘導し、レポーター発現細胞の挙動を調べることで、オーバル細胞が胆管上皮細胞に由来するのか、更に、その後のオーバル細胞の挙動について追跡することが可能である。上記の(2)については、3,5-Diethoxycarbonyl-1,4-Dihydrocollidine(DDC)含有食餌投与によるマウス肝障害モデルでオーバル細胞を誘導した際、多くの癌細胞で高発現することが知られているmiR-21の発現が上昇していることを明らかにした。オーバル細胞由来の細胞株でmiR-21の発現を阻害すると、細胞増殖が阻害され、また、アポトーシス誘導の指標であるCaspase 3と7の活性も上がっていた。したがって、miR-21は、オーバル細胞の増殖を促進し、また、細胞死を抑制する可能性があることが明らかとなった。miR-21のターゲット遺伝子の発現の変動を調べることによって、miR-21によるオーバル細胞の増殖等への制御についてより詳細に解析することが可能である。

当肝脏严重受伤，具有双向分化和对肝实质细胞和胆管上皮细胞的高度增殖潜力的椭圆形细胞被认为是成年肝脏中的干细胞，也被认为是肝癌的癌细胞。然而，尚未揭示椭圆形细胞的特性，发育，增殖和分化的机制。该研究主题旨在通过（1）阐明椭圆形细胞的起源及其诱导中所涉及的信号来了解椭圆形细胞的整体情况，以及（2）分析在椭圆细胞中特异性表达的miRNA及其在发育，增殖，扩散和椭圆形细胞中的作用。在上面的（1）中，为了研究椭圆形细胞可以源自胆管上皮细胞的可能性，我们继续产生在CK19基因启动子的控制下表达CRE-ERT的转基因小鼠，胆管上皮细胞的标志物。 Using the mice obtained by crossing this mouse with a floxed reporter mouse, oval cells are induced while the reporter gene is expressed only in bile duct epithelial cells, and by examining the behavior of reporter-expressing cells, it is possible to track whether the oval cells are derived from bile duct epithelial cells and furthermore, the behavior of the oval cells that follow.关于（2），揭示了在小鼠肝损伤模型中诱导椭圆形细胞，饮食给药3,5-二甲氧氧基1,4-二羟基胆碱（DDC）时，MiR-21的表达（已知在许多癌细胞中高度表达）的表达升高。抑制来自椭圆形细胞的细胞系中miR-21表达的抑制，抑制细胞增殖，也增加了caspase 3和7的活性，这是凋亡诱导的指标。因此，已经揭示了miR-21可能促进椭圆形细胞的增殖并抑制细胞死亡。通过检查miR-21靶基因的表达变化，可以进一步分析通过miR-21的椭圆形细胞增殖的调节。