胆管癌における癌部、周囲異型細胞の分子生物学的解析

胆管癌癌变区域及周围非典型细胞的分子生物学分析

• 批准号: 18790969
• 负责人: 木村 隆
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790969/
• 关键词: 胆管癌; アレイ; 遺伝子; 癌; 異型; ゲノム; 異型性

本研究の目的は胆管癌細胞における染色体異常(ゲノムDNAの増幅,欠損)をゲノムアレイを用いて検索しそのデータを元に癌部と癌周囲異型細胞との違いを検討,更にゲノムDNAの増幅ないし欠損の検索が胆汁細胞診等の微小な臨床検体で癌を診断する手法と成り得るかを検討することであった。胆管癌の凍結切除標本を用いてレーザーキャプチャーマイクロダイセクション法により癌組織中から約1万個の癌細胞のみを切り出しDNAを抽出した。このサンプルのDAN量がゲノムアレイを施行するのに十分であるかを検討するため,濃度が既知のDNAサンプル(血液から抽出)を用いて特定遺伝子(p53)のgenomic DNA配列に対するリアルタイムPCRを行い比較したところ予想より収量が少なく(20pg以下),アレイを行なうのに不十分であった。追加の切除を検討したがマイクロダイセクション装置のレーザーが消耗し,使用不能であったため施行できなかった。このため,胆管癌細胞株を順次入手しゲノムアレイを施行中である。今後,細胞株のゲノムアレイで得られたデータより頻度の高い染色体異常を抽出し,癌組織から抽出したDNAでその染色体異常の有無を確認する予定である。胆管癌細胞株においては胆管癌の標準治療であるgemcitabineに対する抗癌剤感受性試験を実施しており,染色体異常とgemcitabine感受性の関連を検討する予定である。また,昨年作成した胆管癌切除標本のティッシュプロットを用いた免疫染色で「HLA蛋白質発現の検討」と「SonicHedgehog (SHH)蛋白質発現の検討」を行った。その結果,胆管癌ではHLA-classIの発現が高頻度に保たれており,細胞性免疫反応の可能性がある一方でHLA-Gも高発現しており,癌細胞が免疫系からの攻撃を回避している可能性が示唆された。また,SHH発現の検討では胆管癌発生の初期の段階でSHHの関与の可能性が示唆された。

本研究的目的是利用基因组阵列寻找胆管癌细胞中的染色体异常（基因组DNA的扩增或缺失），根据该数据检查癌变区域和癌症周围的非典型细胞之间的差异，并进一步扩增基因组DNA。本研究的目的是检验寻找缺陷或缺陷是否可以成为使用胆汁细胞学等小型临床样本诊断癌症的方法。使用冷冻消融的胆管癌标本，我们从癌组织中切除了大约 10,000 个癌细胞，并使用激光捕获显微切割提取了它们的 DNA。为了检查该样本中的 DAN 量是否足以进行基因组阵列，使用已知 DNA 样本（从血液中提取）对特定基因 (p53) 的基因组 DNA 序列进行实时 PCR。比较时，产量低于预期（低于 20 pg）并且不足以进行阵列。曾考虑进行额外切除，但由于显微切割装置的激光已磨损而无法使用，因此无法进行。为此，我们正在陆续获得胆管癌细胞系并进行基因组芯片。未来，我们计划从细胞系基因组阵列获得的数据中提取经常发生的染色体异常，并使用从癌组织中提取的DNA来确认这些染色体异常的存在或不存在。我们正在进行胆管癌细胞系对胆管癌标准治疗药物吉西他滨的抗癌药物敏感性试验，并计划研究染色体畸变与吉西他滨敏感性之间的关系。此外，我们还使用去年制作的胆管癌切除标本的组织图，通过免疫染色进行了“HLA蛋白表达的检查”和“SonicHedgehog（SHH）蛋白表达的检查”。结果，HLA-I类在胆管癌中维持高频率表达，表明存在细胞免疫反应的可能性，同时HLA-G也高表达，使得癌细胞更容易受到免疫系统攻击的可能性。建议避免。此外，SHH表达的检查表明SHH可能参与胆管癌发展的早期阶段。