新規プロテオミクス手法を用いた卵巣明細胞腺癌関連タンパク質の機能解析

使用新型蛋白质组学方法对卵巢透明细胞腺癌相关蛋白进行功能分析

基本信息

批准号：
18790226
负责人：
荒川憲昭
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

我が国では、悪性度の高い卵巣明細胞腺癌(CCA)の発生率が上昇する傾向にあることから、CCAに対する新しい分子標的治療薬の開発が求められている。しかしCCAにおける分子生物学的知見は十分には得られていないのが現状である。申請者らは、プロテオミクス的アプローチからCCA細胞が特異的に産生しているタンパク質の探索を試みた。2種のCCA細胞株OVTOKOおよびOVISE、比較対照として粘液性腺癌細胞株MCASを用いてプロテオームを比較した結果、OVTOKOとOVISE細胞において25種類のタンパク質の発現量が著しく増加していることが認められた。この結果をさらに精査するために、様々な卵巣癌細胞株や患者組織検体を用いて、ANX4タンパク質およびmRNAの発現量をウエスタンブロット法および定量RT-PCR法により調べたところ、スーパーオキシドディスムターゼ1(SOD1)の発現がタンパク質レベルで、アネキシンIV(ANX4)、ラミニンB2(LAMB2)、ガレクチン3、N-Myc下流制御遺伝子(NDRG1)、ダブルコルチンドメイン含有タンパク質2(DCDC2)の発現がタンパク質およびmRNAの両レベルともに、CCA細胞特異的に増加していることが明らかになった。次にmRNAレベルで発現上昇していた分子の発現をRNA干渉により抑制したところ、ANX4、NDRG1、DCDC2の発現抑制によりCCA細胞の増殖が阻害され、特にANX4の発現抑制はアポトーシス抑制因子Bc1-2の発現低下が認められた。したがって同定されたタンパク質はCCAの新規抗悪性腫瘍薬の標的となることが考えられ、当該タンパク質の機能もしくは発現を制御する薬剤を開発すれば、新たな卵巣CCAの治療に繋がる可能性が示唆された。

在日本，卵巢细胞（CCA）高度恶性透明细胞腺癌的发生率趋于增加，并且需要开发新的CCA分子靶向疗法。但是，目前的情况是CCA中的分子生物学知识尚未完全获得。申请人试图使用蛋白质组学方法搜索CCA细胞专门产生的蛋白质。使用两种CCA细胞系OVTOKO和OVISE比较蛋白质组，以及粘液腺癌细胞系MCA作为比较对照，发现Ovtoko和Ovise细胞中25种蛋白质的表达水平显着升高。 To further examine this result, we investigated the expression levels of ANX4 protein and mRNA using Western blotting and quantitative RT-PCR using various ovarian cancer cell lines and patient tissue specimens, and found that the expression of superoxide dismutase 1 (SOD1) was increased at the protein level, while the expression of annexin IV (ANX4), laminin B2 (LAMB2), galectin 3, N-Myc downstream regulatory gene在蛋白质和mRNA水平下，（NDRG1）和含二核素结构域的蛋白2（DCDC2）均明确增加。接下来，当RNA干扰，ANX4，NDRG1和DCDC2的表达抑制在mRNA水平下升高的分子的表达抑制了CCA细胞的增殖，尤其是抑制Anx4表达导致凋亡抑制剂BC1-2的表达降低。因此，人们认为，已鉴定的蛋白质可以针对CCA的新型抗肿瘤药物，并且有人建议开发调节蛋白质功能或表达的剂可能导致对卵巢CCA的新处理。