The elucidation of expression mechanism and biological functions of a novel biomarker for diffuse alveolar damage

阐明弥漫性肺泡损伤的新型生物标志物的表达机制和生物学功能

基本信息

批准号：
20K07366
负责人：
荒川憲昭
金额：
$ 2.83万
依托单位：
National Institute of Health Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

間質性肺炎の病型の中で、びまん性肺胞傷害（DAD）は特に予後がわるい。我々は、Stratifin(SFN)が、DADの新しい血液診断マーカーとなる可能性を見いだしたが、SFNは肺における役割や機能について未解明な部分が多く、びまん性肺胞傷害との関連性も不明である。そこで本年度は、肺由来の細胞がSFNを発現する可能性があるのかどうか検討するために、種々の培養細胞を用いてSFNの発現解析を行った。SFNタンパク質はウエスタンブロットおよびELISA法にて、遺伝子発現はリアルタイムＲＴ－ＰＣＲにより解析した。気管支上皮由来のHBEC-3KTやNuli-1細胞株、あるいはその初代培養系のHPAEpiC細胞では、細胞内および培養上清中におけるSFN発現量は基礎レベルから高かったが、これらに比べて、II型肺胞上皮由来のA549細胞や肺線維芽細胞の初代培養系ＮＨＬＦやＤＨＬＦでは、SFN発現量は低かった。また、A549やおよび肺線維芽細胞では、血小板由来増殖因子（PDGF）やTGF-β1で刺激を行っても、SFNの発現には変化は見られず、肺の線維化にはSFNは関与していない可能性が示唆された。しかし、A549細胞では、JNJ26854165やNutlin-3、ブレオマイシン、シスプラチンや過酸化水素等の処理により、転写因子p53の活性化が起きるとともに、SFN遺伝子の発現上昇が起き、細胞内よりもむしろ、培養上清中のSFNタンパク質量が著しく上昇した。これらの結果から、DADパターンを呈する間質性肺炎の患者の血中で増加するSFNの産生源の一つは、肺胞上皮である可能性があり、肺胞上皮では損傷を受けた際のp53活性化に伴いSFNが発現上昇し、細胞外（血中）へ放出される可能性が示された。

在间质性肺炎的类型中，弥漫性肺泡损伤（DAD）的预后特别差。我们发现Stratifin（SFN）可能是DAD的新血液诊断标记，但是SFN在肺中具有许多未知的作用和功能，并且其与弥漫性肺泡损伤的关联尚不清楚。因此，今年为了研究肺衍生细胞是否可以表达SFN，我们使用各种培养的细胞进行了SFN表达分析。通过Western印迹和ELISA分析SFN蛋白，并通过实时RT-PCR分析基因表达。在源自支气管上皮的HBEC-3KT和NULI-1细胞系中，在其主要培养物中的HPAEPIC细胞中，SFN表达水平较高，在细胞和培养上清液中，在II型肺泡上皮的一级培养物中，SFN上皮的一级培养物在NHLF和DHLF和DHLF和DHLF的原发性培养物中较低。此外，在A549和肺成纤维细胞中，即使用血小板衍生的生长因子（PDGF）或TGF-β1刺激SFN表达也没有观察到变化，这表明SFN可能与肺纤维化无关。然而，在A549细胞中，用JNJ26854165，Nutlin-3，Bleymycin，顺铂，过氧化氢等处理可激活转录因子p53，并增加SFN基因的表达，从而导致SFN蛋白质在培养的上幼体中显着增加。这些结果表明，具有爸爸模式的间质性肺炎患者血液中SFN产生增加的来源之一可能是肺泡上皮，而SFN表达在损伤后随着p53的激活而增加，并且可能会在细胞外释放（在血液中）。