代謝システムを再現した人工生体感染モデルの構築と抗インフルエンザ薬の検索

再现代谢系统的人工生物感染模型的构建及抗流感药物的寻找

• 批准号: 18890101
• 负责人: 大道寺 智
• 金额: $ 1.69万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890101/
• 关键词: 高病原性トリインフルエンザ; アポトーシス; 代謝システム

高病原性トリインフルエンザウイルスH5N1がパンデミックを起こす可能性が懸念される中、タミフル耐性のウイルスが出現し、新たな抗ウイルス活性を示す化合物が求められている。抗ウイルス活性を示す化合物を探索していく上でウイルスの細胞に対する傷害メカニズムを解明していくことは薬のターゲットを絞る上で重要である。本研究ではインフルエンザの自然宿主であるブタの呼吸器上皮より分離した初代培養細胞を用いてH5N1の病原性を検討した。1才齢のブタ肺胞上皮より分離した初代培養細胞にA/Crow/Kyoto/53/2004(H5N1)、および対照として過去に分離されたH5型ウイルスA/Duck/HongKong/342/78(H5N2)、A/Duck/Hong Kong/820/80(H5N3)を感染させたところ、ウイルス産生量はほぼ同程度であり、それぞれのウイルス感染細胞では高率にウイルス抗原を発現していた。一方、ウイルス感染細胞においてH5N1感染細胞でのみ強い細胞傷害性が認められた。肺胞上皮感染細胞のTUNEL染色ではH5N1感染細胞でのみTUNEL陽性の細胞が認められ、同時にCapsase3、8、9の活性がH5N2、H5N3感染細胞に比べて有意に上昇していた。さらにヒト細気管支由来の初代培養細胞を用いて上記の実験を行ったところ、同様の傾向が認められた。以上の結果よりH5N1の病原性の一因子として、哺乳動物(ヒト)呼吸器上皮における、強いアポトシーシス誘導が関係していることが示唆された。これらの結果はCapsase3、8、9の活性を特異的に抑制することで感染細胞を細胞死から回避させることが可能であることを示唆しておりCaspaseが新たな抗インフルエンザ薬のタニゲットとなり得ることが本研究により明らかとなった。

人们担心高度致病性的禽流感病毒H5N1引起大流行，tamiflu抗性病毒正在出现，并且需要表现出新的抗病毒活性的化合物。在寻找表现出抗病毒活性的化合物时，重要的是要阐明病毒细胞中病毒细胞损伤的机制。在这项研究中，使用从猪的呼吸道上皮分离出的原代培养细胞（流感的天然宿主），研究了H5N1的致病性。 Primary cultured cells isolated from the alveolar epithelium of one-year-old pigs were infected with A/Crow/Kyoto/53/2004 (H5N1) and previously isolated H5 virus A/Duck/HongKong/342/78 (H5N2) and A/Duck/Hong Kong/820/80 (H5N3) as controls, the virus production amount was almost the same, and each virus-infected cell expressed a病毒抗原的高速率。另一方面，仅在感染病毒感染细胞的H5N1感染细胞中观察到强细胞毒性。肺泡上皮感染的细胞的TUNEL染色显示仅在H5N1感染的细胞中显示TUNEL阳性细胞，与H5N2和H5N3感染的细胞相比，Capsase 3、8和9的活性显着增加。此外，上述实验是使用源自人支气管的原代培养细胞进行的，并观察到类似的趋势。以上结果表明，哺乳动物（人）呼吸上皮的垂直分析的强烈诱导是H5N1致病性的一个因素。这些结果表明，通过特异性抑制Capsases 3、8和9的活性，可以从细胞死亡中避免感染细胞，这项研究表明caspase可能是一种新的抗激素药物。

项目成果

ブタ呼吸器初代培養細胞を用いたトリインフルエンザウイルスの感染試験

使用原代培养猪呼吸道细胞进行禽流感病毒感染试验

• 发表时间: 2007
• 作者: Nishino;K.;F.F.Hsu;J.Turk;M.J.Cromie;M.M.Wosten;E.A.Groisman;Katsuyoshi Horibata;堀端克良;田中亀代次;堀端克良;大道寺 智
• 通讯作者: 大道寺 智