エナメリンの機能解析

牙釉质的功能分析

• 批准号: 18890068
• 负责人: 岩田 隆紀
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University (2007)Tokyo Medical and Dental University (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890068/
• 关键词: 歯学; 再生医学; 細胞外マトリックス; エナメルタンパク; 糖鎖; 歯周組織再生; エムドゲイン; シグナル伝達; 蛋白質

エナメリンはエナメル形成に必須の細胞外マトリックスタンパクであり、この遺伝子を欠損するとエナメル質形成不全症を引き起こすことがわかっている。また、近年の臨床報告からエナメル由来のマトリックスタンパクが歯周組織再生に有効であることが示されている。そこで本研究ではエナメリンの機能を調べるためにエナメル上皮由来細胞の初代培養とリコンビナントエナメリンの強制発現および分離精製を行いその機能を検索した。未萌出のブタ第三第臼歯歯胚組織よりエナメル上皮細胞を採取し、上皮細胞専用培地(K-SFM)にて初代培養を行った。同組織よりRNAを抽出しエナメリン貴伝子をクローニングし、発現ベクターに組み込み、ヒト胎児腎臓由来細胞株(HEK293)を用いて強制発現させ、培養上清中からリコンビナントブタエナメリンを分離精製した。その後エナメリンと関連の深い各重細胞(骨芽細胞、セメント芽細胞、エナメル上皮細胞、歯髄細胞)を用いて、リコンビナントエナメリンの細胞接着能を検索した。リコンビナントエナメリンはSDS-PAGEで160k Daの位置に確認され、N型糖鎖による翻訳後修飾が確認された。リコンビナントエナメリンはエナメル芽細胞の多く含まれるエナメル上皮由来細胞において濃度依存的な細胞接着能を示し、その活性はI型コラーゲンの半分程度であったが、同様に作製されたアメロジェニン・アメロブラスチンではこの細胞接着活性は見られなかった。以上の結果より、エナメリンはエナメル芽細胞の接着に特異的に関与していることが示唆された。

牙釉质是牙釉质形成所必需的细胞外基质蛋白，已知该基因的缺失会导致牙釉质发育不全。此外，最近的临床报告表明，牙釉质衍生的基质蛋白对牙周组织再生有效。因此，本研究为了研究牙釉蛋白的功能，对牙釉质上皮来源的细胞进行原代培养，强制表达重组牙釉蛋白，并对其进行分离纯化，探寻其功能。从未萌出的猪第三磨牙胚芽组织中收集牙釉质上皮细胞，并在上皮细胞培养基（K-SFM）中进行原代培养。从同一组织中提取RNA，克隆牙釉蛋白基因，插入表达载体，使用人胚肾来源细胞系(HEK293)强制表达，并从培养上清液中分离纯化重组猪牙釉质。然后，我们使用与牙釉质密切相关的各种重细胞（成骨细胞、成牙骨质细胞、牙釉质上皮细胞和牙髓细胞）研究了重组牙釉质的细胞粘附能力。通过SDS-PAGE在160kDa位置确认了重组牙釉质，并确认了N-聚糖的翻译后修饰。重组牙釉蛋白在含有许多成釉细胞的牙釉质上皮来源的细胞中显示出浓度依赖性细胞粘附能力，其活性约为I型胶原蛋白的一半，但未观察到这种细胞粘附活性。上述结果表明牙釉质特异性参与成釉细胞粘附。

项目成果

新歯周治療

新牙周治疗

• 发表时间: 2006
• 作者: 岩田 隆紀;ほか
• 通讯作者: ほか

歯根膜シートによる歯周組織再生-ナノゲル量子ドット標識細胞の追跡

使用牙周膜片进行牙周组织再生——纳米凝胶量子点标记细胞的追踪

• 发表时间: 2008
• 作者: Nagano T;Oida S;Suzuki S;Iwata T;Yamakoshi Y;Ogata Y;Gomi K;Arai T;Fukae M.;岩田 隆紀
• 通讯作者: 岩田 隆紀

Production and Bioactivity of Recombinant Enamel proteins

重组牙釉质蛋白的生产和生物活性

• 发表时间: 2007
• 作者: Takanori Iwata;Jan CC Hu;Yasuo Yamakoshi;James P Sicomer;Masayuki Yamato;Teruo Okano;Isao Ishikawa
• 通讯作者: Isao Ishikawa

Processing of ameloblastin by MMP-20

• DOI: 10.1177/154405910708600209
• 发表时间: 2007-02-01
• 期刊: JOURNAL OF DENTAL RESEARCH
• 影响因子: 7.6
• 作者: Iwata, T.;Yamakoshi, Y.;Simmer, J. P.
• 通讯作者: Simmer, J. P.

Porcine enamel protein fractions contain transforming growth factor-betal.

猪釉质蛋白组分含有转化生长因子-β。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Periodontology 77・10
• 作者: Nagano T;Oida S;Suzuki S;Iwata T;Yamakoshi Y;Ogata Y;Gomi K;Arai T;Fukae M.
• 通讯作者: Fukae M.