新規ペプチドライゲーション法の開発とそれを用いる膜蛋白質合成

开发一种新的肽连接方法并利用该方法合成膜蛋白

基本信息

批准号：
17750158
负责人：
川上徹
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では膜貫通型蛋白質の合成を念頭に置いた新規ペプチドライゲーション法の開発を目的としていた.これまでのペプチドライゲーション法ではほとんどの場合,ペプチドチオエステルが合成ブロックとして用いられている.しかし,そのペプチドチオエステルは既存の一般的なFmoc固相合成法では直接調製することができない.そこでN-Sアシル基転位反応を基盤として一般的なFmoc固相合成法に適用可能なペプチドチオエステル合成法を開発した.1.チオール補助基を介するN-Sアシル基転位反応とそれに引き続くチオールーチオエステル交換反応によるペプチドチオエステル合成法2.C末端にシステイニルプロリルエステル.(CPE)基を有するペプチドエステルの分子内でのN-Sアシル基転位反応とそれに引き続くジケトピペラジン形成反応によるペプチドチオエステル合成法の2種類の方法である.いずれの方法においても30残基を超える長鎖ペプチドチオエステルの調製に適用することに成功した.また,2の方法ではC末端にCPE基を有するペプチドエステルは,前もってペプチドチオエステルに変換することなく,そのままライゲーション反応に用いることができる.本法を用いて135残基からなる蛋白質の合成に成功した.CPE法ではチオール基を保護することによって反応を制御することができ,N端あるいはC端で選択的に反応を行うことができる.これらによって柔軟に合成戦略を立てることが可能になり,今後これらの成果は複数膜貫通型蛋白質合成に適用されるものと期待される.

本研究的目的是开发一种新的肽连接方法，以合成跨膜蛋白。在大多数常规肽连接方法中，肽硫酯被用作合成模块。肽硫酯不能直接使用现有的通用Fmoc来制备。固相合成法。我们开发了一种基于重排反应的肽硫酯合成方法，可应用于一般的Fmoc固相合成方法1.通过硫醇辅助基团和硫醇-硫代进行N-S酰基重排反应合成肽硫酯。方法2.肽酯分子中的N-S酰基与C末端的半胱氨酰脯氨酰酯(CPE)基团。有两种合成肽硫酯的方法，即先进行重排反应，然后进行二酮哌嗪形成反应，这两种方法都成功地应用于制备具有超过30个残基的长链肽硫酯。 C末端直接连接，不转化为肽硫酯。利用该方法，我们成功合成了由135个残基组成的蛋白质。在CPE方法中，可以通过保护硫醇基来控制反应，并且可以通过保护硫醇基来控制反应，这些结果使得这成为可能。灵活制定合成策略，预计这些成果未来将应用于多种跨膜蛋白的合成。