膜貫通型蛋白質の合成を目的とする新規なペプチドライゲーション法の開発

开发用于合成跨膜蛋白的新型肽连接方法

基本信息

批准号：
15750143
负责人：
川上徹
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

近年,ペプチドセグメントを縮合することによる種々の長鎖ペプチド合成法が報告されている.本研究では取扱いの難しい難溶性膜貫通型蛋白質の合成を目的とする新規なペプチドライゲーション法の開発を目的としている.このような膜蛋白質やまた長鎖ペプチドを合成する場合,縮合部位の選択が重要な問題となる.そこで縮合部位の選択に柔軟性を持たせるため,性質の異なるチオエステル法と拡張型ケミカル(ペプチド)ライゲーション(ネイティブケミカルライゲーション)法を組み合わせて長鎖ペプチドを合成する方法を開発した.アミノ末端に光除去性ライゲーショシ補助基を有するペプチドチオエステルのアミノ末端(およびチオール基)をチアゾリジンとして保護し,チオエステル法によりペプチドセグメントと縮合したのち,チアゾリジンの保護をはずした.拡張型ケミカルライゲーション法により,さらに別のペプチドチオエステルと縮合することによって長鎖ペプチドを合成することに成功した.また,N-Sアシル基転移反応を利用するペプチドチオエステルの新しい合成法を開発した.我々が開発したライゲーション補助基はペプチド鎖中において,酸処理により一部がN-Sアシル基転移反応(ペプチド結合からチオエステル結合)を起こすことが判明した.この現象を利用してペプチドチオエステルを合成することに成功した.今回は,固相担体上でFmoc法によりペプチド鎖の伸長を行い,酸処理ののちチオール交換反応によってペプチドチオエステルを取り出した.Fmoc法によるペプチドチオエステル合成にはさまざまな制約があるが,今回の方法では,直接チオエステルを合成した際に見られるラセミ化をほとんど伴わないことがわかった.これによりFmoc法によるペプチドチオエステルの合成法がより簡便になるものと期待される.

近年来，已经报道了通过凝结肽段合成长链肽的各种方法。这项研究旨在开发旨在综合难以处理，可溶性跨膜蛋白的新型肽连接方法。当合成这种膜蛋白和长链肽时，选择冷凝位点是一个重要的问题。因此，为了在选择凝位位点的选择方面，通过将具有不同性能和扩展化学（肽）连接（天然化学结扎）的硫酯方法结合起来，开发了合成长链肽的方法。在氨基末端具有可占有连接的辅助基团的肽硫酯的氨基末端（和硫醇基团）被作为噻唑烷胺保护，并通过硫酯方法与肽段凝结后，除去了硫酚醇的保护。扩展的化学连接方法允许进一步的肽。我们通过与硫代植物的凝结成功合成了长链肽。我们还开发了一种使用N-S酰基转移反应合成肽酯的新方法。我们已经发现，我们开发的连接辅助组部分通过酸处理在肽链中部分经历N-S酰基转移反应（来自肽键的硫酯键）。我们已经成功地使用了这种现象合成了肽壳。在这种情况下，通过FMOC在固体载体上扩展了肽链，在酸处理后，通过硫醇交换反应提取肽硫醇。使用FMOC对肽硫代植物的合成有各种限制，但是当直接合成硫代植物时，目前的方法几乎没有涉及种族化。预计这将使FMOC合成肽硫代酯。