脂質ラフトにおけるグリア増殖因子シグナル発信機構の解明

脂筏中胶质生长因子信号传递机制的阐明

基本信息

批准号：
17700349
负责人：
若月修二
金额：
$ 2.18万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry (2006)Kyoto University (2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700349/
关键词：
脂質ラフトプロテアーゼ増殖因子グリア細胞神経筋接合部

项目摘要

本研究では,主に神経芽細胞腫N1E-115細胞などの培養細胞への強制発現系を用い,メルトリンβによるグリア増殖因子ニューレグリンの脂質ラフトにおけるプロセシング活性を指標にその制御機構を明らかにすることにより,グリア増殖因子シグナルが神経筋結合部の形成と維持に果たす役割に関する知見を得ることを目的とした.昨年度までに申請者は,メルトリンβを強制発現させた培養細胞を用いたパルスチェイス実験,培養下の後根神経節ニューロンを用いたメルトリンβと各種細胞内小器官に対する抗体染色により,メルトリンβが細胞内の脂質ラフト,「特にゴルジ装置膜においてニューレグリンをプロセシングすることを示唆する知見を得た.このことを直接的,かつ詳細に検証するため,超遠心分画怯を用いた小胞体,ゴルジ装置などの膜性細胞内器官における発現,およびニューレグリンプロセシング活性の検討を行った.さらに,野生型,あるいはプロテアーゼ活性欠損型メルトリンβを強制発現させた.COS7細胞に対し,アミノ末端に蛍光タンパク質を付加したニューレグリンを同時に強制発現させ,蛍光相関分光法による観察を行うことにより,メルトリンβによるニューレグリンのプロセシングの「場」がゴルジ装置膜であることを示すことができた(Yokozeki, T. et al.2007).メルトリンβと同様にADAMファミリーに属する膜型プロテーゼTACE(TNF-α converting enzyme)はニューレグリンをプロセシングするが,上記の解析系ではTACEはむしろ細胞表層におけるプロセシングに関わることから,プロテアーゼを細胞内の異なる領域に局在させることが増殖因子の放出を制御する機構のひとつとして想定できることが分かった.上記に加えて,メルトリンβ欠損マウスの性状について報告することができた(Komatsu, K.,et al.,2007).

在这项研究中，使用熔体β-β曲面因子的脂质脂质脂质脂质筏的控制机制被阐明为指标，主要是在培养细胞上使用强制表达系统（例如N1E-11E-1115细胞）。目的是了解Gria性质因子信号在去年的神经肌肉关节的形成和维持方面的知识。抗体在各种细胞内陷阱上染色，表明默毒素β是细胞中的脂质筏，尤其是在高尔基体装置膜上。和新的Leeglin加工活性。方法可以表明Meltinβ的“新腿”处理是峡谷设备膜（Yokozeki，T。et.2007）。（TNF-α转换酶）处理新的腿部，但是在上述分析系统中，TACE与细胞表面层的处理相当相关，因此通过在不同区域中具有蛋白酶，将其重新定位为增殖因子。它可以被认为是一种控制机制，除了上述机制之外，我还可以报告熔体定义的小鼠的性质（Komatsu，k。Etet al。，2007）。