同所性移植モデルにおける胆嚢癌の転移・進展機序解析とその臨床応用

胆囊癌原位移植模型转移进展机制分析及临床应用

基本信息

批准号：
17790923
负责人：
木村康利
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790923/
关键词：
胆嚢癌肝転移リンパ節転移腹膜播種同所性移植高転移株

项目摘要

1.胆嚢癌の肝転移、リンパ節転移、腹膜播種に関し、それらの生物学的機序の解明を目的とし、胆嚢癌同所性移植モデルを用いた実験・研究を企画立案した。(1)肝・リンパ節転移、腹膜播種の三つの転移・進展形式を個別に有する選択的転移株を樹立する。(2)得られた選択的転移株を用いin-vitro、in-vivo(xenograft)での細胞・分子生物学的解析を行う。(3)既知または新規分子標的に対し転移阻止実験を行い、胆嚢癌の転移・進展に関する新規分子標的治療法を確立する。以上が本研究の主要な目的である。2.本年度の研究実績(1)胆嚢癌細胞株NOZを用いたヌードマウス同所性移植モデルの追試Horiuchiらの確立した胆嚢癌細胞株NOZ同所性移植モデルを追試した。このモデルの再現性をわれわれの研究室において検討したが、安定した同所性移植モデルは再現不能であった。この間にgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子発現ベクター(pCDNA-GFP)を、NOZをはじめとする胆嚢癌細胞株に安定的に導入し、蛍光標識された癌細胞株をin-vitroで作成した。これらの細胞株を細胞生物学的に解析したが、pCDNA-GFP導入NOZ株と、親株であるNOZに増殖能、コロニー形成能など有意な差を認めなかった。(2)各種選択的転移株の解析;教室においてこれまで行ってきた各種選択的転移株の作成方法に準じ、NOZを脾内注入し、肝、リンパ節転移巣、腹膜播種巣より初代培養化し再度同所生移植を繰り返すことで、各種高転移株を作成した。他の細胞株(膵癌、胃癌、大腸癌)においても併行し同様の高転移性株を樹立した。(3)担癌マウスの移植腫瘍巣と各種転移巣腫瘍組織の解析;最終的に得られた、高い選択性を有する各種癌細胞の移植巣と、肝、リンパ節転移巣、腹膜播種巣を凍結標本として保存し、cDNAマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。得られた膵癌高肝転移株ではosteopontinが極めて高発現しており、in-vivoの発現抑制実験において肝転移が低下することを明らかにした(Ohno K, submitting)。(4)研究途上で、同様の実験系が新たに発表された(Egberts JH, et al. Clin Exp Metastasis.2007)。本研究に資する可能性があり、これらの系を用いた更なる研究を現在計画中である。

1。我们使用胆囊癌的原位移植模型进行了计划和计划研究，目的是阐明肝转移，淋巴结转移和胆囊癌的腹膜传播的生物学机制。（1）建立具有三种独立转移和进展形式的选择性转移性菌株：肝脏/淋巴结转移和腹膜传播。（2）使用所获得的体外和体内选择性转移性菌株（异种移植）进行细胞和分子生物学分析。（3）将针对已知或新颖的分子靶标进行转移实验，以建立新型的分子靶向疗法，以用于转移和发育胆囊癌。这些是本研究的主要目标。 2。今年的研究结果（1）使用胆囊癌细胞系NOZ重新检查了裸小鼠原位移植模型，我们遵循Horiuchi等人遵循建立的原位移植模型。该模型的可重复性在我们的实验室中进行了研究，但是稳定的矫置植入模型不可再现。在此期间，将绿色荧光蛋白（GFP）基因表达载体（PCDNA-GFP）稳定地引入胆囊癌细胞系中，包括NOZ，并在体外制备了荧光标记的癌细胞系。对这些细胞系进行了生物学分析，并且在PCDNA-GFP引入的NOZ菌株与父母NOZ（例如增殖能力或菌落形成能力）之间未发现显着差异。（2）分析各种选择性转移性菌株；根据迄今为止在教室中使用的方法，NOZ被注入脾脏，并从肝脏，淋巴结转移灶和腹膜传播灶和原位肝移植重复以产生各种高度转移性菌株。其他细胞系（胰腺癌，胃癌，结肠癌）也同时发生，并建立了类似的高度转移性菌株。（3）分析肿瘤小鼠中肿瘤移植物和各种转移性肿瘤组织；以高选择性以及肝脏，淋巴结转移和腹膜传播灶的最终移植作为冷冻样本存储，并使用cDNA微阵列进行基因表达分析。获得的胰腺癌菌株高度肝转移表明骨桥蛋白的表达极高，并且在体内实验中，肝转移降低（Ohno K，提交）。（4）在研究过程中发表了一个新的类似实验系统（Egberts JH等，Clin ExpMentastasis。2007）。它可能有助于这项研究，目前正在使用这些系统的进一步研究。