Leigh症候群リンパ球における細胞学的特性の検討

Leigh综合征淋巴细胞的细胞学特征检查

基本信息

批准号：
17790721
负责人：
中島尚美
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790721/
关键词：
Leigh症候群電子伝達系細胞内ATP DCA

项目摘要

Leigh症候群(LS)は小児期に発症し、急性あるいは亜急性に進行し、重篤な神経学的後遺症を残したり、死に至ることも多い予後不良な疾患である。治療法は確立されておらず、対症療法や効果のみられた特殊な治療を試みる程度である。乳酸・ピルビン酸値が高値であることからミトコンドリア異常が推測され検索されているが、その原因は多様であり、分子遺伝学的にはミトコンドリアDNA異常、核遺伝子にコードされる電子伝達系複合体サブユニットの遺伝子異常が報告されている。近年、多くの進行性神経疾患の病態にCaspase依存性、またはERストレス関連の細胞死が関与し、その中心的な役割をミトコンドリアが担っていることが解明されつつあり、ミトコンドリア異常症の病態における細胞死の関与とその抑制はミトコンドリア異常症の治療法の開発の糸口となると考え、Leigh症候群(LS)において臨床的に使用しやすいリンパ芽球を用いて、ATP量および治療薬の効果を検討した。ミトコンドリア異常症(MELAS、LS)患者よりインフォームドコンセントのもと採取したリンパ球を、EBウイルスにて芽球化して使用した。通常培地で培養後、グルコース欠損培地に変更し、細胞内ATP量、Caspase3/7活性を経時的にルミノメーターで測定した。更にMELAS治療薬であるDCAを加え同様の検討を行った。MELAS、LS患者ともリンパ芽球ではCaspase3/7活性は正常対照と差が見られなかったが、細胞内ATP量は軽度低下していた。DCAによるATP量増加は患者細胞にのみ認められ、濃度依存性に増加したが、LSでの増加は軽度だった。LS患者細胞でのATP増加が軽度だったことは、DCAが臨床的にLSへの効果が低いことと一致した。今後症例数を増やすとともに、臨床データと組み合わせて効果的な治療法選択のために使用可能か検討する予定である。

利综合征（LS）是一种不良的预后，在童年时期发展，在急性或紧急情况下进展，留下严重的神经系统后遗症，并且经常死亡。尚未建立治疗方法，足以尝试有症状治疗和具有效果的特殊治疗方法。线粒体异常已被估计和搜索，因为乳酸和碎裂酸很高，但原因是多种多样的，并且分子遗传学是线粒体DNA异常，核基因中的电子透射复合物已报道。近年来，已经阐明了线粒体在许多晚期神经疾病中参与caspase依赖性或ER应力相关的细胞死亡，线粒体是其核心作用的原因。线粒体异常治疗的线索，并使用易于在Leigh综合征（LS）中使用的淋巴芽检查ATP和治疗药物的作用。根据线粒体异常（MELAS，LS）患者收集的淋巴细胞被用于EB病毒并使用。在正常培养基中培养后，将其更改为缺乏葡萄糖的培养基，并且随着时间的推移，用发光计测量了细胞内ATP和caspase 3/7的量。此外，通过添加Melas治疗DCA进行了相同的检查。在MELAS和LS患者中，CASPASE3/7的活性都没有显示出与正常对比度的差异，但是细胞ATP的差异有些降低。 DCA的ATP增加仅被识别为患者细胞并升高至浓度，但LS的增加是温和的。 LS患者细胞中的轻度ATP与DCA对LS的临床作用低相符。将来，我们计划将来增加病例数，并考虑是否可以与临床数据结合使用有效的治疗选择。