腎微小循環におけるRhoキナーゼの役割およびその分子機構の検討

Rho激酶在肾微循环中的作用及其分子机制研究

基本信息

批准号：
17790562
负责人：
本間康一郎
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の研究にて腎輸入細動脈の自動調節能である筋原性収縮反応と、尿細管糸球体フィードバック反応をin vivoにおいてCCDカメラを用いて可視化することに成功し、その機序について検討したが、本年度は細胞伸展装置を用いて筋原性収縮反応をin vitro実験系で再現することを試みた。背景,目的血管自動調節能である筋原性収縮反応(MYO)は、伸展刺激に対して収縮を示す反応である.我々はMYOのin vitro実験系を確立し、AMPキナーゼ、Rhoキナーゼの関与につき検討した。さらに、肥満モデルであるZucker fatty ratにおける腎輸入細動脈MYOの減弱を以前に報告したが、これに対するAMPキナーゼが関与について検討を加えた。方法シリコン製チャンバー上に血管平滑筋細胞を培養し、細胞伸展装置を用い刺激を加えた細胞を用いて、myosin light chain, AMPキナーゼ,Rhoキナーゼの活性化のマーカーであるMYPT-1のリン酸化抗体を用いwestern blottingにて検討した。Zucker fatty ratにAMPキナーゼの活性化薬(AICAR)を慢性投与し、生体内CCDカメラを用いMYOを観察した。結果細胞伸展刺激後10秒の時点でmyosin light chain、AMPキナーゼ、MYPT-1それぞれのリン酸化の発現亢進が確認された。さらにAICAR投与によりZucker fatty ratの腎輸入細動脈MYOの減弱が一部改善された。考察MYOは伸展刺激後10秒という非常に急速な反応であり、その反応にAMPキナーゼ、Rhoキナーゼが関与していることが示唆された。さらに、AMPキナーゼ活性化薬は糖尿病初期のhyperfiltrationを改善する可能性が考えられた。

在去年的一项研究中，我们成功地看到了进口肾动脉的自动调节能力，并使用CCD摄像头在体内在体内进行了肾小球肾小球反馈反应，并检查了这种机制的机制。今年，我们试图使用细胞扩展装置在体外实验系统中复制肌源性收缩反应。背景：肌源性收缩反应（MYO）是血管的靶向自由调节能力，是一种表现出与延伸刺激的收缩的反应。我们建立了一个Myo的体外实验系统，并检查了AMP激酶和Rho激酶的参与。此外，我们以前报道了肥胖模型Zucker Fatty Rat中肾脏进口的动脉MYO的减弱，并检查了AMP激酶的参与。方法：在硅腔室上培养血管平滑肌细胞，并使用细胞延伸装置刺激的细胞使用蛋白质印迹使用MyPT-1的磷酸化抗体（肌球蛋白轻链，AMP激酶和Rho激酶）的磷酸化抗体进行研究。 Zucker Fatty大鼠被长期施用AMP激酶激活剂（AICAR），并使用体内CCD摄像头观察到Myo。结果，在细胞延伸刺激后10秒钟，确认了肌球蛋白轻链，AMP激酶和MYPT-1的磷酸化表达增加。此外，AICAR的给药部分改善了Zucker脂肪大鼠肾脏进口小动脉myo的衰减。讨论MYO是扩展刺激后10秒的非常快速的反应，这表明AMP激酶和Rho激酶参与了反应。此外，人们认为AMP激酶激活剂可以改善早期糖尿病的过滤。