腎微小循環におけるRhoキナーゼの役割およびその分子機構の検討

Rho激酶在肾微循环中的作用及其分子机制研究

基本信息

批准号：
17790562
负责人：
本間康一郎
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の研究にて腎輸入細動脈の自動調節能である筋原性収縮反応と、尿細管糸球体フィードバック反応をin vivoにおいてCCDカメラを用いて可視化することに成功し、その機序について検討したが、本年度は細胞伸展装置を用いて筋原性収縮反応をin vitro実験系で再現することを試みた。背景,目的血管自動調節能である筋原性収縮反応(MYO)は、伸展刺激に対して収縮を示す反応である.我々はMYOのin vitro実験系を確立し、AMPキナーゼ、Rhoキナーゼの関与につき検討した。さらに、肥満モデルであるZucker fatty ratにおける腎輸入細動脈MYOの減弱を以前に報告したが、これに対するAMPキナーゼが関与について検討を加えた。方法シリコン製チャンバー上に血管平滑筋細胞を培養し、細胞伸展装置を用い刺激を加えた細胞を用いて、myosin light chain, AMPキナーゼ,Rhoキナーゼの活性化のマーカーであるMYPT-1のリン酸化抗体を用いwestern blottingにて検討した。Zucker fatty ratにAMPキナーゼの活性化薬(AICAR)を慢性投与し、生体内CCDカメラを用いMYOを観察した。結果細胞伸展刺激後10秒の時点でmyosin light chain、AMPキナーゼ、MYPT-1それぞれのリン酸化の発現亢進が確認された。さらにAICAR投与によりZucker fatty ratの腎輸入細動脈MYOの減弱が一部改善された。考察MYOは伸展刺激後10秒という非常に急速な反応であり、その反応にAMPキナーゼ、Rhoキナーゼが関与していることが示唆された。さらに、AMPキナーゼ活性化薬は糖尿病初期のhyperfiltrationを改善する可能性が考えられた。

在去年的研究中，我们成功地使用CCD相机将肾传入小动脉的自动调节能力即肌源性收缩反应和体内肾小球反馈反应可视化，并研究了其机制，但今年我们尝试重现。使用细胞拉伸装置的体外实验系统中的肌原性收缩反应。背景、目的肌源性收缩反应（MYO）是一种血管自动调节能力，是对拉伸刺激而表现出收缩的反应。我们建立了MYO的体外实验系统，并研究了AMP激酶和Rho激酶的参与。我们考虑过这一点。此外，我们之前报道过，在肥胖模型 Zucker 脂肪大鼠中，肾传入小动脉 MYO 减弱，我们研究了 AMP 激酶是否参与其中。方法：我们在硅胶室上培养血管平滑肌细胞，并使用细胞拉伸装置刺激它们，以确定 MYPT-1 的磷酸化，这是肌球蛋白轻链、AMP 激酶和 Rho 激酶激活的标记物。使用抗体进行。我们对 Zucker 脂肪大鼠长期施用 AMP 激酶激活剂 (AICAR)，并使用体内 CCD 相机观察 MYO。结果：细胞拉伸刺激后 10 秒，证实肌球蛋白轻链、AMP 激酶和 MYPT-1 的磷酸化增加。此外，AICAR 给药部分改善了 Zucker 脂肪大鼠肾传入小动脉 MYO 的衰减。讨论 MYO 是一种非常快速的反应，在拉伸刺激后仅需要 10 秒，并且有人认为 AMP 激酶和 Rho 激酶参与了这种反应。此外，人们认为 AMP 激酶激活剂可以改善糖尿病早期阶段的过度滤过。