細胞内CI^-によるCdc25B活性制御を介した細胞周期制御メカニズムの解明

通过细胞内 CI^- 调节 Cdc25B 活性阐明细胞周期控制机制

基本信息

批准号：
17790154
负责人：
宮崎裕明
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790154/
关键词：
MKN28 MKN45 NKCCl G0 G1期遅延細胞内Cl-濃度 cyclin p21 MKN-28 MKN-45 細胞増殖細胞周期 Na^+,K^+,2Cl^- cotransporter furosemide G1 arrest

项目摘要

ヒトの胃癌由来細胞株であるMKN28,45は、低分化型(MKN45)、中分化型(MKN28)に分類されており、それぞれ細胞増殖速度が異なる。本研究では、細胞内Cl^-濃度の変化が細胞増殖速度を制御するという実験仮説に基づき、細胞内Cl^-イオン濃度に影響を与えるNa^+,K^+,2Cl^- cotransporter(NKCC1)の発現・活性レベル、およびNKCCの特異的阻害剤で処理した際の細胞増殖、および細胞周期に与える影響について、両細胞間での比較を行った。Real-time PCRによりNKCC mRNA発現レベルを測定したところ、MKN45のNKCC mRNAレベルは、MKN28よりも高かった。NKCC阻害剤感受性容積減少率により測定したNKCC機能活性は、MKN45でより高かった。NKCC阻害薬は、NKCC機能活性の高いMKN45においてのみ、G0/G1期遅延による増殖抑制効果を示した。NKCCの機能阻害により細胞内Cl^-濃度低下を介した細胞増殖抑制が想定されることから、低Cl^-濃度培地によりMKN細胞を培養したところ、G0/G1期遅延による増殖抑制効果を示した。また、G0/G1期からS期への進行を促進するcyclin E/CDK2およびcyclin D/CDK4・6の機能を阻害するp21タンパクの解析を行ったところ、低Cl^-濃度培地で培養した細胞において、p21タンパクの発現量が有意に上昇していた。本研究により、Cl^-輸送体の活性変化による細胞内Cl^-濃度の変化がcdc25をはじめとする細胞周期関連タンパク質の活性化を制御することで、細胞増殖をコントロールしている可能性が強く示唆された。

MKN28,45是人胃癌来源的细胞系，分为低分化型（MKN45）和中分化型（MKN28），每种细胞增殖率不同。本研究基于细胞内Cl^-浓度变化控制细胞增殖速率的实验假设，我们重点关注影响细胞内Cl^-离子浓度的Na^+,K^+,2Cl^-协同转运蛋白（NKCC1） ) 比较了两种细胞的表达和活性水平，以及用特定 NKCC 抑制剂处理时对细胞增殖和细胞周期的影响。当通过实时PCR测量NKCC mRNA表达水平时，MKN45的NKCC mRNA水平高于MKN28。通过 NKCC 抑制剂敏感的体积减少率测量，MKN45 的 NKCC 功能活性更高。 NKCC抑制剂仅在具有高NKCC功能活性的MKN45中通过延迟G0/G1期而显示出生长抑制作用。据推测，NKCC功能的抑制通过降低细胞内Cl^-浓度来抑制细胞生长，因此当MKN细胞在低Cl^-浓度培养基中培养时，由于G0/G1期延迟而表现出增殖抑制作用。塔。此外，我们分析了抑制细胞周期蛋白E/CDK2和细胞周期蛋白D/CDK4/6功能的p21蛋白，促进G0/G1期向S期进展，发现在低Cl^-浓度培养基中培养的细胞p21蛋白表达水平显着升高。这项研究表明，由于Cl^-转运蛋白活性的变化而导致的细胞内Cl^-浓度的变化可能通过调节细胞周期相关蛋白（例如CDC25）的激活来控制细胞增殖。

项目成果

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专利数量（0）

UT-B1 urea transporter plays a noble role as active water transporter in C6 glial cells.

DOI：
10.1016/j.bbrc.2006.10.097
发表时间：
2006-12
期刊：
Biochemical and biophysical research communications
影响因子：
3.1
作者：
Aya Ogami;H. Miyazaki;N. Niisato;T. Sugimoto;Y. Marunaka
通讯作者：
Aya Ogami;H. Miyazaki;N. Niisato;T. Sugimoto;Y. Marunaka

Action of neltenexine on anion secretion in human airway epithelia.

neltenexine 对人气道上皮细胞阴离子分泌的作用。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Biochem Biophys Res Commun 356(4)
影响因子：
0
作者：
Niisato N;Hasegawa I;Tokuda S;Taruno A;Nakajima K;Miyazaki H;Iwasaki Y;Marunaka Y.
通讯作者：
Marunaka Y.

Synergic action of insulin and genistein on Na^+/K^+/2Cl^- cotransporter in renal epithelium

胰岛素和染料木黄酮对肾上皮Na^/K^/2Cl^-协同转运蛋白的协同作用

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Biochemical and biophysical research communications. 332
影响因子：
0
作者：
Ueda-Nishimura;T.;Niisato;N.;Miyazaki;H.;Naito;Y.;Yoshida;N.;Yoshikawa;T.;Nishino;H.;Marunaka;Y.
通讯作者：
Y.

Chloride turnover and ion-transporting activities of yolk-sac preparations (yolk balls) separated from Mozambique tilapia embryos and incubated in freshwater and seawater.

从莫桑比克罗非鱼胚胎中分离并在淡水和海水中孵育的卵黄囊制剂（卵黄球）的氯周转和离子传输活性。