ウイルスの細胞内動態定量化情報に基づいた人工遺伝子ベクター開発の新規アプローチ

基于病毒细胞内动力学定量信息开发人工基因载体的新方法

• 批准号: 17790110
• 负责人: 秋田 英万
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790110/
• 关键词: 細胞内動態; 遺伝子治療; 人工ベクター; アデノウイルス; 定量化

アデノウイルスと人工ベクター間の遺伝子発現比較を行った結果、同程度の遺伝子発現を示すためには、LipofectAMINE PLUSにおいてはadenovirusと比較して、3桁以上の遺伝子コピー数を必要とすることが明らかとなっている。H16年度おいて、両ベクターの細胞内動態を解析した結果、両者の発現効率の大きな差を生み出す要因が、核に移行してから後の効率にあることを明らかとした。H17年度は、このような核移行後発現効率がどのようなメカニズムに基づくものであるかを明らかとした。転写効率を生み出すメカニズムについて、Ad由来のコア蛋白やゲノム構造に由来する可能性や、遺伝子の核内解離の違いを解析した。Adをプレ感染してコア蛋白を核内に導入しても、プレ感染なしのものと比べて有為な上昇は認められなかつた。また、GFPをコードするAdゲノムと、プラスミドDNAを核内インジェクションした結果、GFP発現率に有為な差は認められなかった。このことから、アデノウイルス側に転写を促進する因子があるという可能性は否定された。一方、解離型DNAのみを検出可能なin situ hybridizationを用い、アデノウイルスとプラスミドDNAをTSA増感システムによって高感度に検出した結果、Adの方がLFNと比較して非常に効率的な染色が得られ、LFNの低い核内解離効率が、核移行後の発現効率の低さの原因となる事が示唆された。さらに、アデノウイルスにおいては、ユークロマチンへの特異的な局在が認められた。このような、核内の局在や解離の違いが、核内転写の違いに寄与することが示唆される。

腺病毒和人工载体之间基因表达的比较表明，为了显示相似的基因表达，Lipofectamine Plus需要与腺病毒相比的基因拷贝数为三个或更多数量级。在2004年，我们分析了两个向量的细胞内动力学，并揭示了导致两者之间表达效率较大的因子是转移到核后的效率。在2005年，我们阐明了基于这种核后表达效率的哪些机制。分析了产生转录效率的机制，以确定它们可以从AD衍生的核心蛋白和基因组结构中得出的可能性，以及基因核解离的差异。即使AD预感染和核心蛋白引入了核，与没有预感染的AD也没有观察到显着增加。此外，由于编码GFP和质粒DNA的AD基因组的核注射，GFP表达速率未观察到显着差异。这否认有可能促进腺病毒侧转录的因素。另一方面，使用TSA敏化系统使用高敏感性检测到可以检测到分离性的DNA，腺病毒和质粒DNA的原位杂交，并且建议AD染色比LFN更有效地比LFN更有效，从而导致LFN较低的LFN的核离解效率较低，这是LFN较低的核能转化效率，这是核的转化效率的效率较低。此外，在腺病毒中观察到了特异性定位到白染色质。有人认为，核定位和解离的差异导致核转录的差异。

项目成果

A multifunctional envelope-type nano device for novel gene delivery of siRNA plasmids

• DOI: 10.1016/j.ijpharm.2005.05.021
• 发表时间: 2005-09-14
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACEUTICS
• 影响因子: 5.8
• 作者: Moriguchi, R;Kogure, K;Harashima, H
• 通讯作者: Harashima, H

Development of efficient packaging method of oligodeoxynucleotides by a condensed nano particle in lipid envelope structure.

开发通过脂质包膜结构中凝聚的纳米颗粒有效包装寡脱氧核苷酸的方法。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biol Pharm Bull 28
• 作者: Y.Yamada;K.Kogure;Y.Nakamura;K.Inoue;H.Akita;F.Nagatsugi;S.Sasaki;T.Suhara;H.Harashima
• 通讯作者: H.Harashima

Quantitative and mechanism-based investigation of post-nuclear delivery events between adenovirus and lipoplex.

• DOI: 10.1093/nar/gkl1165
• 发表时间: 2007
• 期刊: Nucleic acids research
• 影响因子: 14.9
• 作者: Hama S;Akita H;Iida S;Mizuguchi H;Harashima H
• 通讯作者: Harashima H