転写因子の発現制御によるがん細胞の増殖抑制

通过调节转录因子表达抑制癌细胞生长

基本信息

批准号：
17790086
负责人：
佐藤武史
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790086/
关键词：
転写因子 Sp1 がん細胞遺伝子発現プロモーター活性増殖速度

项目摘要

我々は細胞のがん化に関わるβ-1,4-ガラクトース転移酵素(β-1,4-GalT)Vの転写制御機構を解析し、この酵素の遺伝子発現は転写因子Sp1で制御されていることを明らかにした。Sp1は様々ながん細胞で発現が増大することが報告されており、がん細胞の増殖に必要な血管内皮細胞増殖因子や、浸潤に関わるマトリックスメタロプロテアーゼなどの遺伝子発現を制御している。従って、がん細胞においてSp1の発現やSp1のDNAへの結合を効率よく低下させることができれば、癌細胞の悪性形質を担うこれらの分子の発現を抑制できると考えられる。本研究では、Sp1がDNAへ結合するのを阻害する薬剤Mithramycin Aや、Sp1の発現を抑制するsiRNAを用いて、がん細胞におけるβ-1,4-GalTV遺伝子の発現や、がん細胞の増殖速度について解析した。ヒト肺がん細胞A549細胞をMithramycin Aで処理すると、β-1,4-GalTV遺伝子の発現及びプロモーター活性に低下が見られ、細胞増殖速度も対照に比べて著しく低下した。次に、Sp1 siRNAでA549を処理すると、β-1,4-GalTVやSp1の遺伝子発現、並びにプロモーター活性は著しく低下した。従って、このsiRNAを用いて癌細胞の悪性形質を抑制することが可能であると考えられた。次に、どの程度がんの悪性形質が抑制されているかを評価するために、動物細胞発現ベクターにSp1 siRNAを組み込んだプラスミドを作製した。このプラスミドをA549細胞に導入し、薬剤存在下で培養してSp1の発現を抑制したがん細胞株を複数樹立した。これらの細胞を用いて、増殖速度、血管内皮細胞への接着性や浸潤能についての解析を継続中である。

我们分析了参与细胞癌变的β-1,4-半乳糖基转移酶（β-1,4-GalT）V的转录控制机制，发现该酶的基因表达受到转录因子Sp1的调节。那。据报道，Sp1在多种癌细胞中表达增加，它控制着癌细胞增殖所必需的血管内皮生长因子和参与侵袭的基质金属蛋白酶等基因的表达。因此，如果可以有效地减少癌细胞中的Sp1表达和Sp1与DNA的结合，则认为可以抑制这些负责癌细胞恶性特征的分子的表达。在本研究中，我们使用抑制Sp1与DNA结合的药物Mithramycin A和抑制Sp1表达的siRNA来抑制癌细胞中β-1,4-GalTV基因的表达，并分析其增殖率。当光神霉素A处理人肺癌A549细胞时，β-1,4-GalTV基因的表达和启动子活性降低，细胞增殖率也较对照显着降低。接下来，当A549用Sp1 siRNA处理时，β-1,4-GalTV和Sp1的基因表达和启动子活性显着降低。因此，认为可以使用该siRNA抑制癌细胞的恶性特征。接下来，为了评估癌症恶性特征被抑制的程度，通过将Sp1 siRNA掺入动物细胞表达载体中来创建质粒。将该质粒导入A549细胞并在药物存在下培养，以建立多个Sp1表达被抑制的癌细胞系。使用这些细胞，我们正在继续分析它们的增殖率、对血管内皮细胞的粘附性和浸润能力。