癌細胞における新奇β-1,4-ガラクトース転移酵素V遺伝子の発現調節機構の解明

阐明新型β-1,4-半乳糖基转移酶V基因在癌细胞中的表达调控机制

基本信息

批准号：
12771428
负责人：
佐藤武史
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究実施計画に基づいて研究を行い、以下の新しい知見が得られた。1)昨年度に単離したゲノムDNAからβ-1,4-GalT V遺伝子の5'上流域(2.2kb)を調製し、これをホタルルシフェラーゼ遺伝子の上流に繋いでプラスミドを作製した。このプラスミドを種々のヒト癌細胞(A549,SW480,'K562,Molt-4)に導入,発現させ、ルシフェラーゼ活性を測定することでβ-1,4-GalT V遺伝子5'上流域のプロモーター活性を評価した。その結果、β-1,4-GalT Vプロモーターを含むプラスミドを細胞に導入すると、対照に比べて6-200倍高い活性が見られたので、単離したDNA断片がプロモーター活性を担っていると考えられた。さらに、β-1,4-GalT Vプロモーターから転写因子AP-1,c-Myb, Etsファミリーが結合する部位を除くと、SW480においてプロモーター活性の低下が見られた。2)β-1,4-GalT Vプロモーターには、srcチロシンキナーゼによって活性化される転写因子と結合する領域が存在することから、srcチロシンキナーゼの阻害剤であるherbimycin Aを用いて、ヒト肺癌細胞A549におけるβ-1,4-GalT V遺伝子の発現動態及び糖鎖構造の変化の有無を解析した。薬剤で処理した細胞では、未処理の細胞に比べて抗リン酸化チロシン抗体PY-20と反応するタンパク質の数が減少し、β-1,4-GalT V遺伝子の発現も1/3に低下していた。一方、薬剤で処理した細胞ではβ-1,4-ガラクトース残基と結合するRCA-Iや高分岐糖鎖を認識するL-PHAとの反応性が、幾つかの糖タンパク質糖鎖で減少していた。以上の結果から、herbimycin Aを用いてβ-1,4-GalT V遺伝子の発現を抑制し、癌細胞の形質発現に関る糖鎖構造を制御できると考えられる。

该研究是根据今年的研究实施计划进行的，并获得了以下新知识。 1）β-1,4-galt V基因的5'上盆地（2.2kb）是从去年分离出的基因组DNA制备的，这是通过将其连接到萤火虫荧光素酶基因上游创建的。。该质粒被引入并表达给各种人类癌细胞（A549，SW480，'K562，MOLT-4），并测量荧光素酶活性来测量β-1,4-Galt V Gene 5'i i的活性。结果，当将含有β-1,4-加仑V启动子的质粒引入细胞中时，该活性比对比度高6至200倍，以使分离的DNA片段是我认为启动子活性的原因。此外，不包括转录因子AP-1，C-MYB和ETS家族结合的位点，在SW480中降低了启动子活性。 2）由于β-1,4-galt V启动子与SRC酪氨酸激酶激活的转录因子相结合，因此使用Herbimycin A的人类肺癌，该菌素A是SRC酪氨酸激酶的抑制剂。 β-1,4-GALT V基因的发展以及细胞A549中糖链结构的变化。在用药物处理的细胞中，与未加工的细胞相比，与抗氧化物丙氨酸抗体PY-20反应的蛋白质减少了，并且β-1,4-GALT V基因的表达降低到1/3。另一方面，在用药物处理的细胞中，与β-1,4-半乳糖残基结合的RCA-I反应，识别高支流糖链的L-PHA被几种糖和弦降低。我是。基于上述结果，可以认为可以使用Herbimycin A抑制β-1,4-GALT V基因的表达，并且可以控制与癌细胞转化有关的糖链结构。