新規β-1,4-ガラクトース転移酵素の機能の解析とその糖鎖生物学への応用

新型β-1,4-半乳糖基转移酶的功能分析及其在糖生物学中的应用

基本信息

批准号：
10771312
负责人：
佐藤武史
金额：
$ 0.32万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究実施計画に基づいて研究を行い、細胞の癌化と新規β-1,4-ガラクトース転移酵素(β-1,4-GalT II)遺伝子の発現動態との関係について以下の新しい知見が得られた。1,MTAgはマウス線維芽細胞(NIH3T3)の形質転換細胞であり、NIH3T3に比べ高分岐糖鎖の発現が2倍高く、ヌードマウス皮下に移植すると速やかに腫瘍を形成し肺への転移能も高い。両細胞のβ-1,4-GalT活性を測定した結果、MTAgでNIH3T3に比べて1.2倍高い活性が検出された。次に、両細胞におけるβ-1,4-GalT II遺伝子と既知のβ-1,4-GalT遺伝子の発現を調べた。その結果、既知のβ-1,4-GalT mRNAの発現は両細胞間で同じだったが、β-1,4-GalT II mRNAの発現はMTAgで2.4倍増大していた。本研究を行っている間に、新たにβ-1,4-GalT遺伝子が幾つかクローニングされたので、これらについても調べたが、細胞の癌化に伴う増大は認められなかった。2,ヒト大腸癌由来SW480にβ-1,4-GalT IIのアンチセンスDNAを導入することで、細胞表面糖鎖パターンを変え、癌細胞の形質を変化させることができるかどうかを検討した。細胞膜糖タンパク質をレクチンを用いて解析した結果、アンチセンス導入細胞で2,6分岐側鎖やポリ-N-アセチルラクトサミン構造の発現が減少していた。以上の結果から、β-1,4-GalT II遺伝子は細胞の癌化に伴って増大し、この遺伝子の発現を制御することで、癌細胞の転移に関与する2,6分岐側鎖やポリ-N-アセチルラクトサミン構造の発現を抑制することができることが判明した。さらに、この遺伝子導入細胞の細胞増殖速度や細胞接着性について検討したが、対照細胞と比べて有意な差は見られなかった。今後は、in vivoで造腫瘍能や転移能を検討する予定である。

我们根据今年的研究实施计划进行研究，并具有以下有关与细胞癌指示与新的β-1,4-甲分析过渡酶之间关系的新知识（β-1,4-galt II ）。我得到了它。 1，MTAG是小鼠成纤维细胞的转化细胞（NIH3T3）。由于测量了两个细胞的β-1,4-galt活性，MTAG的活性比NIH3T3高1.2倍。接下来，检查了两个细胞中β-1,4-GALT II基因的表达和已知的β-1,4-GALT基因的表达。结果，两个细胞之间已知的β-1,4-galt mRNA的表达均相同，但是MTAG中β-1,4-GALT II mRNA的表达增加了2.4倍。在这项研究中，克隆了一些新的β-1,4-galt基因，因此我们检查了这些基因，但由于细胞癌而没有增加。 2。将β-1,4-GALT II抗义DNA引入源自人类结直肠癌的SW480可以改变细胞表面糖链模式并改变癌细胞的特征。通过使用凝集素分析细胞膜蛋白的结果，降低了2,6侧链和抗渗透介绍细胞中的2,6侧链和聚-N-乙酰乳糖胺结构的表达。基于上述结果，β-1,4-GALT II基因由于细胞癌而增加，并通过控制该基因的表达，涉及癌细胞转移的链和聚事实证明，乙酰乳糖胺结构的表达可以抑制。此外，我们检查了基因引入的细胞的细胞生长速度和细胞粘附性，但是与受控细胞相比没有显着差异。将来，我们计划考虑使用体内肿瘤和转移。