細胞内シグナル伝達とミオシンの局在化機構

细胞内信号转导和肌球蛋白定位机制

基本信息

批准号：
05780532
负责人：
祐村恵彦
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780532/
关键词：
細胞運動ミオシン細胞内シグナルカルシウムイオン

项目摘要

ミオシンの細胞内局在化とそれを制御する細胞内シグナルについて、研究を進めた。細胞性粘菌の走化性物質であるcAMPで、細胞を刺激すると、レセプターを介して一連の細胞内シグナル伝達が作動され、同時にミオシンの局在変化が起こる。ミオシンを移動させるシグナルを明らかにするため、シグナルの一部欠損の突然変異体を用い、走化性刺激の際のミオシンの移動の有無を調べたところ、cGMP形成能の低いもの、また細胞内Caイオンの変化しない株でミオシンの移動が見られなかった。次に、Caイオノフォアを用いて、細胞内のCaイオン濃度を人為的に上昇させると、ミオシンの移動を誘起できた。また、cGMPでもミオシンの反応を引き起こせた。しかし、これら両者で反応に違いが見られ、Caイオンは少なくとも細胞膜から内質へのミオシンの移動に関与することが明らかになった。細胞局所へのミオシンの局在化は、いずれかのシグナルが細胞内で局所的に高濃度になったことに起因すると考え、顕微鏡下でマイクロキャピラリーを用い、局所的に細胞にシグナルを与え、これによりミオシンが移動するかを蛍光抗体法で調べるための条件を整えた。ミオシンのリン酸化部位を欠く変異体をもちいた実験の条件も確立した。

我们对肌球蛋白的细胞内定位和控制它的细胞内信号进行了研究。当细胞受到盘基网柄菌的化学引诱剂cAMP刺激时，一系列细胞内信号转导通过受体被激活，同时发生肌球蛋白的定位。为了阐明导致肌球蛋白移动的信号，我们使用了缺乏某些信号的突变体，并检查了在趋化刺激下是否存在肌球蛋白运动，在钙离子没有变化的菌株中没有观察到肌球蛋白的运动。接下来，他们能够通过使用 Ca 离子载体人为增加细胞内 Ca 离子浓度来诱导肌球蛋白运动。此外，cGMP 还能够触发肌球蛋白反应。然而，观察到两者之间的反应存在差异，并且清楚Ca离子至少参与了肌球蛋白从细胞膜到内质的移动。我们认为肌球蛋白在细胞中的定位是由于细胞内任一信号的局部高浓度所致，并且我们在显微镜下使用微毛细管将信号局部施加到细胞，这为研究肌球蛋白是否移动创造了条件。荧光抗体法。我们还使用缺乏肌球蛋白磷酸化位点的突变体建立了实验条件。