魚油摂取による成熟型SREBP-1c生成抑制機序の解明

阐明鱼油摄入抑制成熟 SREBP-1c 产生的机制

基本信息

批准号：
16700536
负责人：
仲谷照代
金额：
$ 1.09万
依托单位：
National Institute of Health and Nutrition
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16700536/
关键词：
魚油 SREBP-1c

项目摘要

SREBP(sterol regulatory element binding protein)は脂肪酸合成酵素の発現量を制御している転写因子である。魚油摂取による脂肪合成抑制メカニズムに、成熟型SREBP-1c量の減少が関与している。これまでの申請者らの研究により、魚油をマウスに摂取させると肝臓での成熟型SREBP-1c量が顕著に減少すること、またその成熟型SREBP-1c量減少作用には、摂取魚油量の違いにより2つの段階において調節されていることを見い出している(J.Lipid Res.2003)。本研究では特に魚油少摂取によるSREBP-1c量減少メカニズムに焦点をおき解明する。魚油摂取少量の場合(10〜20en%)、成熟型SREBP-1c蛋白量の低下はSREBP-1c mRNA量の有意な変化なしに引き起こされることから、未成熟型SREBP-1c蛋白の成熟型への移行(プロセシング)を抑制することにより成熟型SREBP-1c量を低下させていると考えられる。SREBP-2の場合はSCAP, S1Pというタンパク質の結合がプロセシング機構に必要であるが、魚油摂取においてSCAP, S1P遺伝子発現量の変化がみられなかったことから、これら以外のものの関与が考えられた。本研究は、魚油摂取によるSREBP-1蛋白のプロセシング抑制メカニズムを明らかにするため、酵母two-hybrid法により未成熟SERBP-1cに結合するタンパク質を同定することを試みた。研究方法:未成熟型SREBP-1cをN末、中央、C末部分と3ケ所に分け、それぞれのおとり遺伝子をGAL4DNA結合ドメイン融合体として発現させ、これらに結合するタンパク質を酵母two-hybrid法により、human liver cDNA library (GAL4活性化ドメインとの融合タンパク)からスクリーニングした(1次スクリーニング)。研究結果:未成熟型SREBP-1cをおとりとした酵母two-hybrid法により、SREBP-1c結合タンパク質の1次スクリーニングを行い、有望な遺伝子7個見出した。これらのタンパクが魚油によるSREBP-1蛋白のプロセシング抑制メカニズムに関与している可能性がある。

SREBP（甾醇调节元件结合蛋白）是控制脂肪酸合酶表达水平的转录因子。成熟 SREBP-1c 数量的减少参与了鱼油摄入抑制脂肪合成的机制。申请人的研究表明，当小鼠摄入鱼油时，肝脏中成熟的SREBP-1c的量显着减少，我们发现它在两个阶段受到差异性调节(J.Lipid Res.2003)。在本研究中，我们将重点关注因鱼油摄入量低而导致 SREBP-1c 水平降低的机制。当鱼油摄入量较少(10-20en%)时，成熟SREBP-1c蛋白的量减少，而SREBP-1c mRNA的量没有任何显着变化，这表明未成熟的SREBP-1c蛋白转变为成熟形式。通过抑制迁移（加工），可以减少成熟 SREBP-1c 的数量。就SREBP-2而言，蛋白质SCAP和S1P的结合对于加工机制是必要的，但由于没有观察到SCAP和S1P基因的表达水平随着鱼油摄入而发生变化，因此认为除了这些之外还有其他原因。可能会涉及。在本研究中，我们尝试使用酵母双杂交方法鉴定与未成熟 SERBP-1c 结合的蛋白质，以阐明鱼油摄入抑制 SREBP-1 蛋白质加工的机制。研究方法：将未成熟的SREBP-1c分为N端、中心、C端三部分，每个诱饵基因表达为GAL4 DNA结合结构域融合体，与这些结合的蛋白为使用酵母二杂交法提取人肝脏cDNA文库（带有GAL4激活结构域的融合蛋白）进行筛选（第一次筛选）。研究结果：我们以未成熟的SREBP-1c为诱饵，采用酵母二杂交法对SREBP-1c结合蛋白进行了初步筛选，发现了7个有前景的基因。这些蛋白质可能参与鱼油抑制 SREBP-1 蛋白质加工的机制。