難治性気道炎症性疾患におけるToll様受容体発現異常とそのメカニズムの解明

解析顽固性气道炎症性疾病中Toll样受体的异常表达及其机制

• 批准号: 16790056
• 负责人: 首藤 剛
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790056/
• 关键词: 嚢胞性線維症(CF); toll-like receptor-2(TLR2); NF-κB; ERストレス; エピジェネティック; DNAメチル化; 5-azacytidine(5-AC); プロモーター; 炎症性疾患; 嚢胞性線維症; toll-like receptor; 気管支上皮細胞; ER overload response; 細胞内シグナル; 遺伝子発現; 炎症性サイトカイン

本研究では,難治性気道炎症疾患嚢胞性線維症(CF)におけるTLR2遺伝子の発現および応答性の上昇とそのメカニズムの解明を種々の方法を用いて行った.CF気道上皮細胞におけるTLR2発現上昇のメカニズムを解明することを目的とし,CF細胞におけるA)NF-κB経路の異常,B)ERストレスの過剰活性化,C)エピジェネティック遺伝子制御機構の破綻などの可能性に関して,種々の分子生物学的検討を行った.上記A)の可能性を検討するため,NF-κB阻害作用を有するIκBαのドミナント変異体を導入し,実験を行った.その結果,CF細胞におけるTLR2の発現上昇には,NF-κBのシグナル伝達経路に異常を来してはいなかった.次に,上記B)の可能性を検討するため,ERストレス誘導剤であるTunicamycin, Thapsigargin, DTTを用いてそのTLR2発現に対する影響を観察したが,全く効果を示さなかったことから,変異CFTR蓄積によるERストレスの過剰活性化は,TLR2発現に関与していなかった。最後に,上記C)の可能性を検討するため,DNA脱メチル化促進剤である5-azacytidine(5-AC)を16HBE14o-に処理したところ,TLR2プロモーター上における脱メチル化が引き起こされ,その遺伝子発現が増強されたことから,気道上皮細胞におけるTLR2の発現はDNAメチル化によって調節されていることが示唆された.さらに,bisulfiteを用いたsequence法により16HBE14o-細胞およびCFBE41o-細胞におけるTLR2プロモーター領域のDNAメチル化を数値化したところ,CFBE41o-細胞において,顕著に脱メチル化されていることを見い出した.これらの結果より,CF患者でみられる慢性気道性炎症は,TLR2のエピジェネティックな発現上昇により引き起こされている可能性が示唆された.

在这项研究中，我们使用了各种方法来阐明TLR2基因在难治性气道炎症性疾病中的表达和反应性升高及其机制及其机制。我们的目的是阐明CF气道上皮细胞中TLR2表达升高的机制，并了解nF-κBB-κBB-κB的失败，b）extigation tlr2表达升高，b）b-）b）。基因调控机制。进行了各种分子生物学研究，涉及潜力。为了研究上述A）的可能性，引入了具有NF-κB抑制作用的IκBα的显性突变体，并进行了实验。结果，在NF-κB的信号传导途径中，CF细胞中TLR2表达的增加并非异常。接下来，为了研究上面的b），我们引入了ER诱导剂肌氨霉素。使用Thapsigargin和DTT来观察其对TLR2表达的影响，但没有显示影响，并且突变体CFTR积累对ER应力的过度激活无参与TLR2表达。最后，为了调查上述c）的可能性，用16HBE14O-脱甲基化启动子处理了5-氮杂丁胺（5-AC），并在TLR2启动子上进行了脱甲基化处理，并提高了其基因表达，这表明TLR2在气道上皮细胞中受到DNA上皮细胞的表达是由DNA甲基化调节的。此外，当通过使用硫磺的序列方法在16HBE14O和CFBE41O细胞中定量DNA甲基化时，我们发现它在CFBE41O细胞中被显着脱甲基化。这些结果表明，在CF患者中看到的慢性气道炎症可能是由于TLR2表达的表观遗传增加引起的。

项目成果

DeltaF508 CFTR pool in the ER is increased by calnexin overexpression

ER 中的 DeltaF508 CFTR 池因钙联蛋白过度表达而增加

• 发表时间: 2004
• 期刊: Mol.Biol.Cell 15
• 作者: Shimohara S;Murakami T;Morikawa M;Matsuo J;Nagayama S;Shuto T;Suico MA;Okiyoneda T;Yamatsu I;Mizushima T;Shimasaki T;Kai H.;Suico MA et al.;Okiyoneda T et al.;Suico MA et al.;Lu Z et al.;Suico MA et al.;Okiyoneda T et al.
• 通讯作者: Okiyoneda T et al.

Characterization of the trafficking pathway of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in baby hamster kidney cell

小仓鼠肾细胞囊性纤维化跨膜电导调节因子运输途径的表征

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Pharmacol.Sci. 95
• 作者: Shimohara S;Murakami T;Morikawa M;Matsuo J;Nagayama S;Shuto T;Suico MA;Okiyoneda T;Yamatsu I;Mizushima T;Shimasaki T;Kai H.;Suico MA et al.;Okiyoneda T et al.
• 通讯作者: Okiyoneda T et al.

Chromium(III) ion and thyroxine cooperate to stabilize the transthyretin tetramer and suppress in vitro amyloid fibril formation.

铬(III)离子和甲状腺素协同稳定转甲状腺素蛋白四聚体并抑制体外淀粉样原纤维的形成。

• 发表时间: 2006
• 期刊: FEBS Lett. 580(2)
• 作者: Sato T;Ando Y;Susuki S;Mikami F;Ikemizu S;Nakamura M;Suhr O;Anraku M;Kai T;Suico MA;Shuto T;Mizuguchi M;Yamagata Y;Kai H.
• 通讯作者: Kai H.

The regulation of human (β-defensin 2 by the ETS transcription factor MEF is enhanced by PML protein

PML蛋白增强ETS转录因子MEF对人β-防御素2的调节

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Pharmacol.Sci. 95
• 作者: Shimohara S;Murakami T;Morikawa M;Matsuo J;Nagayama S;Shuto T;Suico MA;Okiyoneda T;Yamatsu I;Mizushima T;Shimasaki T;Kai H.;Suico MA et al.;Okiyoneda T et al.;Suico MA et al.
• 通讯作者: Suico MA et al.