機能的LH受容体の発現誘導によるブタ体外成熟卵子の発生能向上に関する研究

诱导功能性LH受体表达提高猪体外成熟卵母细胞发育潜力的研究

基本信息

批准号：
16780195
负责人：
島田昌之
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

体外成熟培養により、高い発生能を有するブタ成熟卵子を作出するためには、体内と同様に排卵誘起ホルモンであるLHにより卵子の成熟を誘導する必要がある。しかし、体外成熟培養に用いるブタ卵子、および卵子に付着する卵丘細胞にはLHに対する受容体が発現していない。従って、LH受容体(LHR)の形成メカニズムを追求した。その結果、FSHの刺激により卵丘細胞にLH受容体が形成されること、これはFSHにより卵丘細胞内でcAMPが合成され、このcAMPが、Epacを介してPI 3-kinaseを活性化し、PKBを介してLHR mRNAが転写されていることが明らかとなった。また、LHR mRNAの安定化には、エストロジェンとアンドロジェンは負の作用を有すのに対して、プロジェステロン正の作用を有することも示した。このプロジェステロンの作用は、プロジェステロン受容体A(PRA)依存的であり、このPRAの作用には、卵子の排卵に重要な役割を果たす卵丘細胞の膨潤、細胞間接着の剥離があること、この作用はADAMTS-1依存的であること、PRAを活性化するプロジェステロンは、卵丘細胞内でFSH刺激により活性が上昇するコレステロール合成系を介して分泌されていること、コレステロール合成系に関わる遺伝子群の発現も上昇していることなどを明らかとした。これらの結果から、ブタ卵子の成熟を誘起するために必須であるLHシグナルは、FSHにより活性化されるPI 3-kinase経路を解するLHR mRNAの転写促進と、そのmRNAの安定化をもたらすPR系により誘導されることが初めて明らかとしたものである。また、これらの経路に関わるプロジェステロン分泌機構、PRの作用に関しても数多くの知見を見いだした。今後は、卵丘細胞に効率よくLHRを誘導する培養系を開発し、ブタ卵子を中心とした卵子の体外成熟培養環境の改善を行う計画である。

为了通过体外成熟培养产生具有高发育潜力的成熟猪卵母细胞，需要像在体内一样使用促排卵激素LH来诱导卵母细胞成熟。然而，LH 受体在用于体外成熟培养的猪卵母细胞和附着于卵母细胞的卵丘细胞中不表达。因此，我们研究了LH受体（LHR）的形成机制。结果，卵丘细胞中由于FSH的刺激而形成LH受体，这意味着卵丘细胞中通过FSH合成cAMP，并且该cAMP通过Epac激活PI 3激酶。据揭示，LHR mRNA通过PKB转录。。我们还表明，虽然雌激素和雄激素对稳定 LHR mRNA 有负面影响，但黄体酮却有正面影响。孕酮的这种作用依赖于孕酮受体A（PRA），PRA的作用包括卵丘细胞的肿胀和细胞间粘附的脱离，这在排卵中发挥重要作用，这种作用依赖于ADAMTS-1。事实上，激活PRA的孕酮是通过胆固醇合成系统在卵丘细胞内分泌的，其活性在FSH刺激下增加，并且与胆固醇合成系统相关的基因的表达也增加等。这些结果表明，对于诱导猪卵母细胞成熟至关重要的LH信号，通过FSH激活的PI 3激酶途径促进LHR mRNA的转录，并促进稳定该mRNA的PR。经澄清，这是由系统引起的。我们还发现了很多关于黄体酮分泌机制以及PR参与这些途径的作用的信息。未来，我们计划开发一种有效诱导卵丘细胞LHR的培养系统，改善卵母细胞（主要是猪卵母细胞）体外成熟的培养环境。

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Expression of two progesterone receptor isoforms in cumulus cells and their roles during meiotic resumption of porcine oocytes

两种孕酮受体亚型在卵丘细胞中的表达及其在猪卵母细胞减数分裂恢复过程中的作用

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J Mol Endocrinol 33
影响因子：
0
作者：
Michihiro Hirayama;Yakov Pesin;Michihiro Hirayama;Michihiro Hirayama;白石崇人;白石崇人;白石崇人;白石崇人;白石崇人;白石崇人;Yamashiro H;Yamashiro H;Yamashiro H;Wang HF;Yamashiro H;Shimada M;Yamashita Y;Shimada M
通讯作者：
Shimada M

The role of calcium/calmodulin-dependent protein kinase II on the inactivation of MAP kinase and p34cdc2 kinase during fertilization and activation in pig oocytes.

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 在猪卵母细胞受精和激活过程中 MAP 激酶和 p34cdc2 激酶失活中的作用。