低分子プローブを用いたアブシジン酸生合成・代謝機構の解明

使用小分子探针阐明脱落酸生物合成和代谢机制

基本信息

批准号：
15710158
负责人：
轟泰司
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Shizuoka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15710158/
关键词：
アブシジン酸

项目摘要

1.5'α,8'-シクロ-ABAのin vitro代謝検討本研究中に,シロイヌナズナCYP707AがABA8'-水酸化酵素遺伝子として同定された。そこで,この遺伝子を昆虫細胞で発現させて得たABA8'-水酸化酵素活性ミクロソーム画分を使って,5'α,8'-シクロ-ABAの水酸化反応を調べた。その結果,前年度に報告したin vivo実験と同様に5'α,8'-シクロ-ABAは全く水酸化を受けないことがわかった。また,5'α,8'-シクロ-ABAはABAの弱い拮抗阻害剤になっていることも明らかになった。2.ABA8'-水酸化酵素の基質特異性これまでに合成した45種類のABAアナログを用いて,ABA代謝不活化の鍵酵素であるABA8'-水酸化酵素の基質特性を精査した。まず,シロイヌナズナCYP707A3ミクロソームを用いて,すべてのアナログの水酸化実験を行い,水酸化のための構造要求性を調べた。次に,ABAとABAアナログを同時に供与して水酸化実験を行い,ABAアナログのABA水酸化阻害活性を測定した。その結果,(1)水酸化される部位(C-8')とその近傍(C-9')を修飾すると,水酸化を受けない,(2)側鎖のカルボキシル基を還元したり空間配置を変化させると水酸化を受けない,(3)側鎖6位のメチル基と環1'の水酸基を除去しても水酸化を受ける,ということが判明した。また,水酸化を受けないアナログの多くがABA水酸化阻害活性(拮抗阻害)を示した。この結果は,ABA8'-水酸化酵素の水酸化反応に対する基質構造要求性は比較的厳しく,基質結合部位への結合に関する構造要求性は水酸化反応の場合ほど厳しくないことを示唆している。以上の情報は,ABA8'-水酸化酵素に特異的な阻害剤を創製するのに極めて有用である。

在这项研究中，体外代谢为1.5'α，8'-Cyclo-Aba，拟南芥CYP707A被确定为ABA8'-羟化酶基因。因此，使用在昆虫细胞中表达该基因获得的ABA8'-羟化酶活性微粒体馏分，研究了5'α，8'-Cyclo-ABA的羟基化反应。结果表明，如上一年报道的体内实验中，5'α，8'-Cyclo-ABA根本没有进行羟基化。还揭示了5'α，8'-Cyclo-Aba是ABA的弱拮抗剂。 2。ABA8'-羟化酶的底物特异性ABA8'-羟化酶的底物特性（ABA代谢失活的关键酶）使用45个ABA类似物迄今合成的45种ABA类似物进行了检查。首先，使用拟南芥CYP707A3微粒体进行了所有类似物的羟基化实验，以研究羟基化的结构要求。接下来，进行羟基化实验同时提供ABA和ABA类似物，并测量了ABA羟基化抑制ABA类似物的活性。结果表明，（1）修改羟基化位点（C-8'）及其附近（C-9'）不会经过羟基化，（2）减少侧链上的羧基或更改空间排列的羧基不会导致氢氧化的甲基化和（3）在6个组的位置，并在6个组的位置上，并将其置于6号甲基的位置，并将其置于6号甲基的位置，并将其置于6号链中，该甲基是甲基的，该甲基是甲基的，该甲基是属于甲基化的二链，并将其置于6链中，并导致甲基化的甲基化和（3）。羟基化。此外，许多不经历羟基化的类似物都显示出ABA羟基化活性（拮抗剂抑制）。结果表明，ABA8'-羟化酶的羟基化反应的底物结构要求相对严格，与基结合位点结合的结构要求不如羟基化反应的结构要求。以上信息对于创建特定于ABA8'-羟化酶的抑制剂非常有用。