光反応性基を導入した自殺基質によるアブシジン酸8'位水酸化酵素の標識と解明

使用包含光反应基团的自杀底物标记和阐明脱落酸 8-羟化酶

基本信息

批准号：
13760086
负责人：
轟泰司
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Shizuoka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760086/
关键词：
アブシジン酸自殺基質代謝酵素光反応性 P450

项目摘要

自殺基質型光反応性プローブの合成経路について検討した。P450活性部位に非可逆的に結合し不活性化する官能基として既報の末端アセチレンをアブシジン酸(ABA)8'位に導入し、光反応性基として一般的なアジド基を3'位に導入することにした。光反応性基は、その性質上、合成の最終段階で導入すべきである。そこで、まずABA骨格を完成させてから最後にアジド基導入を行う合成戦略を選択した。3'位へのアジド基導入については、ABAから2段階で達成する方法を開発した。一方、8'位へのアセチレン基導入については、ABAのトリメチルシクロヘキセノン環をジメチルシクロヘキサジエノン環とした対称ABAアナログに共役不可的に8'位アセチレンを導入することにした。この対称ABAアナログの合成は既報であったが、側鎖部のC5炭素鎖を一段階で導入するために必要なペンテニノールの入手が困難であったため、C3+C2の二段階で導入する手法に切り替えた。まず、2,6-ジメチルフェノールからジメチルシクロヘキサジエノン骨格を酸化反応で得(同時に4位カルボニルはアセタール化)、1位カルボニルに有機リチウム反応でブチノール側鎖を導入した。Red-Alによって側鎖三重結合を二重結合に還元後、二酸化マンガン酸化で側鎖末端をカルボニルとした。Wittig型の反応で残りのC2単位を導入して得た対称ABAアナログのメチルエステル体にヨウ化銅存在下Grignard試薬を反応させて、8'位アセチレンABAメチルエステル体を得た。環部二重結合を塩基性条件下過酸化水素でエポキシ化後、続くアジ化ナトリウム処理およびエステラーゼ処理によって、目的の自殺基質型光反応性プローブの合成を達成した。

研究了自杀底物型光电反应性探针的合成途径。先前报道的末端乙炔是在脱甲酸（ABA）的8'位置引入的，作为一个官能团，它不可逆地与P450的活性位点结合并灭活P450，并在3'位置引入了叠氮化物组作为光电反应组。由于其性质，应在合成的最后阶段引入光反应性基团。因此，我们选择了一种合成策略，其中首先完成了ABA骨骼，然后最终引入了Azido组。开发了一种方法，可以从ABA分为两个步骤来实现，以将叠氮化物组引入3'位置。另一方面，关于在8'位置引入乙炔基团，在8'位置的乙炔位于ABA的三甲基环己烯酮环是二甲基甲基环己酮环。尽管先前已经报道了这种对称ABA类似物的合成，但很难获得戊烯醇，这是在一个阶段中引入C5碳链的必要条件，因此我们切换到在两个阶段进行引入的方法：C3+C2。首先，通过氧化反应（同时将第四位的羰基甲苯甲甲苯甲苯甲醇从2,6-二甲基苯酚获得二甲基环己二烯酮酮链链），并通过有机锂反应将丁醇侧链引入了第一位。将侧链三键降低到具有红色AL的双键后，通过氧化二氧化碳将侧链末端变成羰基。通过在碘化铜的存在下，通过在Wittig-type反应中引入剩余的C2单位获得的对称ABA类似物的甲基酯与Grignard试剂反应，以获得位置8'的乙炔ABA甲基酯。在基本条件下，将环双键用过氧化氢氯键，然后进行叠氮化钠处理和酯酶处理，以实现所需的自杀底物型光电反应性探针的合成。