ニトロカテコールアミン類の高感度分析法の開発とその応用

硝基儿茶酚胺类高灵敏分析方法的建立及其应用

• 批准号: 15790023
• 负责人: 角田 誠
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790023/
• 关键词: カテコールアミン; HPLC; 化学発光; NO

昨年度、ニトロカテコールアミン類の高感度分析を行うための条件検討の内、蛍光誘導体化条件の最適化を行った。本分析法においては化学発光検出による高感度を行おうと考えているが、カテコール環6位のニトロ基の影響により、カテコールアミンに比べてニトロカテコールアミンは化学発光効率が低い。そこで今年度においては、Pt-Rh還元カラムを用いてニトロカテコールアミンのニトロ基をアミノ基にオンラインで還元することにより、化学発光検出における感度上昇を目指した。本研究において用いたHPLCシステムは以下の通りである。ニトロカテコールアミンを陽イオン交換カラムと逆相カラムの順に用いて分離した。その後、還元カラムによりオンラインでニトロ基を還元した後、蛍光誘導体化試薬(エチレンジアミン)と100℃で反応させ、生じた蛍光物質と化学発光試薬(TDPO+H_2O_2)とを反応させた。最終的に生じた化学発光を検出した。還元カラムを設置する位置について検討した結果、逆相カラムにより分離されたニトロカテコールアミンが、100℃下で還元カラムを通過してから蛍光誘導体化試薬と反応する条件が最もオンライン還元に適していることがわかった。還元カラムにより、カラムがない時と比べておよそ40-170%化学発光検出における感度が上昇した。今後、還元カラムを組み込んだ、ニトロカテコールアミン分析系を構築し、生体試料へと応用する予定である。

去年，在对硝化酚胺进行高灵敏度分析的条件下，优化了荧光衍生化的条件。在此分析中，我们打算通过检测化学发光来实现高灵敏度，但是由于硝基在儿茶酚环第6个位置的影响，硝化酚胺的化学发光效率低于儿茶酚胺。因此，今年，我们旨在通过使用PT-RH还原柱将硝基甲醇胺的硝基硝基甲醇胺降低到氨基组来提高化学发光检测的敏感性。这项研究中使用的HPLC系统如下：使用阳离子交换柱和顺序中的反向相位柱分离硝化酚胺。之后，使用还原柱在线减少硝基，然后在100°C下反应荧光衍生物试剂（乙二胺），并对所得的荧光物质和化学发光试剂（TDPO+H_2O_2）反应。检测到最终的化学发光。由于检查了放置还原柱的位置，因此发现通过反向相位柱分离的硝化甲醇在100°C下通过还原柱的条件，然后与荧光衍生化试剂反应最适合在线减少。与不存在色谱柱相比，还原柱在大约40-170％的化学发光检测中提高了敏感性。将来，我们计划构建一个结合了还原柱的硝化酚分析系统，并将其应用于生物样品。