酵母HOG経路のシグナル特異性決定に関わるPbs2MAPKKの足場機能の研究

Pbs2MAPKK参与确定酵母HOG通路信号特异性的支架功能研究

基本信息

批准号：
15770082
负责人：
舘林和夫
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770082/
关键词：
出芽酵母 HOG経路高浸透圧 MAPキナーゼ PBS2 STE11 STE50 ドッキング・サイト Pbs2 Ssk2 シグナル特異性

项目摘要

生物は絶えず生活環境の変化にさらされており、こうした環境ストレスに迅速に適応するために、ストレス応答MAPキナーゼ(MAPK)情報伝達経路が存在する。この経路は出芽酵母からヒトにいたるまでよく保存されており、出芽酵母では高浸透圧に対するHOG経路が存在する。HOG経路にはMAPKキナーゼ(MAPKK)であると同時に足場蛋白質でもあるPbs2が存在し、HOG経路を構成する複数の因子と結合しシグナル伝達の足場となることで、迅速かつ正確なシグナル伝達を可能にしている。Pbs2の足場機能を分子レベルで明らかにするため、相互作用する因子との結合の分子様式について詳細に解析した。1.私は昨年度Pbs2MAPKKのN末領域がSte11 MAPKKKと結合することを見いだした(Tatebayashi et al.;EMBO.J.2003)。本研究ではPbs2のN末に系統的な欠失を導入し、共沈実験によりSte11との結合領域を詳しく解析した。Ste11結合領域はPbs2のN末に2カ所存在し、どちらか一方だけでもSte11との結合は保持され、両者を同時に欠失させてはじめて結合がなくなることがわかった。この領域は私が昨年度発見したPbs2のSsk2/Ssk22 MAPKKKとのドッキング・サイトとは異なっており、Pbs2は複数のMAPKKKに対して異なるドッキング・サイトを有していることがわかった。2.Ste11結合蛋白質のSte50がSte11を介することなしにPbs2と結合することがわかった。Pbs2内のSte50結合部位を調べたところ、Ste11に対するPbs2の2カ所の結合部位がSte50との結合にも関与することが明らかになった。Pbs2、とSte50の結合はこれまで報告されておらず、HOG経路の活性化や特異性決定の分子機構を解明する大きな手がかりになると考えられた。

生物体不断暴露于其生活环境的变化，为了快速适应这些环境应力，存在应力响应性的MAP激酶（MAPK）信号传导途径。从萌芽的酵母到人类，这种途径得到了很好的保存，在萌芽的酵母中，有一个高渗透压的猪途径。 HOG途径包含PBS2，既是MAPK激酶（MAPKK）和脚手架蛋白，该蛋白与组成HOG途径的多个因素结合，并作为信号传导的支架，允许快速准确的信号传导。为了阐明PBS2在分子水平上的支架功能，详细分析了与相互作用因子结合的分子模式。 1。我发现PBS2MAPKK的N末端区域去年与Ste11 Mapkk结合（Tatebayashi等；Embo.J。2003）。在这项研究中，在PBS2的N端引入了系统的缺失，并通过共沉淀实验详细分析了带有Ste11的结合区域。两个Ste11结合区域存在于PBS2的N端，并且一个保留了与Ste11的结合，并且发现仅当两者同时删除两者时才丢失了结合。该区域与我去年在我发现的SSK2/SSK22 MAPKK上发现的对接站点不同，我发现了PBS2，事实证明，PBS2有不同的对接网站，用于多个MAPKKKS。 2。发现Ste11结合蛋白Ste50与PBS2结合而无需通过Ste11进行介导。当在PBS2中检查Ste50结合位点时，据揭示了PBS2与Ste11的两个结合位点也参与与Ste50的结合。到目前为止，尚未报道PBS2和Ste50之间的结合，被认为提供了一个很好的指南，以阐明HOG途径激活和特异性测定的分子机制。