口臭原因物質産生酵素の機能解析

产生引起口臭的物质的酶的功能分析

基本信息

批准号：
03J07824
负责人：
深町はるか
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

口臭の原因物質としてメチルメルカプタンや硫化水素といった揮発性硫化物が注目されている。これらの揮発性硫化物は口腔内細菌がメチオニンを基質としてメチルメルカプタンを、またシステインを基質として硫化水素を産生することが分かっている。特に、歯周病患者からは歯周ポケットの深さに比例して呼気中から高い濃度の揮発性硫化物が検出される。本研究では歯周病患者の歯肉縁下プラーク中の細菌であるPorphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum,およびTreponema denticolaに着目し、揮発性硫化物産生酵素をコードする遺伝子をクローニングし、これらの酵素学的な性質を解析した。現在までに、P.gingivalis, F.nucleatumおよびT.denticolaのメチオニン分解酵素、F. nucleatumのシステイン分解酵素を単離精製した。メチオニン分解酵素の性質としては、P.gingivalisとT.denticolaのメチオニン分解酵素のKm値を比較した結果、メチオニンに対する親和性はT.denticolaが極めて高いことが分かった。また、菌体から産生するメチルメルカプタン量をガスクロマトグラフィーで比較した結果、T.denticolaが口腔内に存在する程度の低濃度のメチオニンからメチルメルカプタンを高産生することが分かった。また、揮発性硫化物の発生を抑制するという報告のある塩化亜鉛について、P.gingivalis, F.nucleatumおよびT.denticolaの揮発性硫化物産生に対する抑制効果を解析した。まず、全菌体をから産生されるメチルメルカプタン量をガスクロマトグラフィーで測定した結果、産生されるメチルメルカプタン量は塩化亜鉛量に依存して抑制され、P.gingivalis, T.denticolaは10ppm, F.nucleatumは100ppmでメチルメルカプタン産生が完全に抑制された。つぎに、P.gingivalis, F.nucleatumおよびT.denticolaの組換えメチオニン分解酵素を用いて塩化亜鉛による酵素活性の抑制をみたところ、すべての酵素ともに、100ppmの塩化亜鉛でメチオニン分解酵素が完全に阻害されることから、塩化亜鉛によるメチオニン分解酵素の阻害がおこりメチルメルカプタンが産生されなくなることが明らかになった。

甲基汞和硫化氢等挥发性硫化物吸引着引起口臭的物质。已经发现，这些挥发性硫化物使用蛋氨酸作为底物和硫化氢使用半胱氨酸作为底物产生口腔内细菌。特别是，在呼出的呼吸中检测到高浓度的挥发性硫化物，与牙周口袋的深度成比例。在这项研究中，我们专注于牙龈细菌牙龈细菌，核细菌核细菌和treponema denticola，它们是牙周疾病患者的细菌，以及编码挥发性硫化物硫化物的enzymes和分析其enz eNz的副产品的牙周斑块。迄今为止，已分离并纯化了牙龈疟原虫，F。nucleatum和T. denticola和半胱氨酸降解酶的蛋氨酸降解酶。至于蛋氨酸降解酶的特性，我们比较了牙龈疟原虫和牙霉菌的蛋氨酸降解酶的Km值，发现牙霉菌对甲氨酸具有极高的亲和力。此外，通过气相色谱法比较了由细菌产生的甲基汞的量，发现牙霉菌以低浓度的甲氨酸产生高甲基汞，这足以存在于口腔中。此外，对于氯化锌据报道抑制了挥发性硫化物的产生，我们分析了牙龈疟原虫，F。nucleatum和T. denticola对挥发性硫化物的产生的抑制作用。首先，通过气相色谱法测量了从整个细菌细胞产生的甲基汞的量，并根据氯化锌的量抑制产生的甲基汞的量，并在10 ppm处完全抑制甲基汞的生产。 Next, when recombinant methionine degradation enzymes of P. gingivalis, F. nucleatum and T. denticola were used to suppress enzyme activity by zinc chloride, it was revealed that 100 ppm of zinc chloride completely inhibits the methionine degradation enzyme for all enzymes, resulting in inhibition of methionine degradation enzyme by zinc氯化物，导致甲基汞的产生。