細胞移植による眼組織の機能的再構築

细胞移植重建眼组织功能

基本信息

批准号：
03F00144
负责人：
小阪淳
金额：
$ 0.38万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F00144/
关键词：
虹彩色素上皮細胞神経幹細胞光受容細胞 opsin vimentin

项目摘要

網膜色素変性症、緑内障のように、網膜神経細胞が不可逆性の変性をきたす疾病に対して、眼組織由来の幹細胞システムを樹立し、その幹細胞から、光受容細胞、神経節細胞を産生して再生医学的治療を行うことが本研究の目的である。初年度は以下のような研究成果を得た。(1)生後1-2日目のヒヨコ虹彩色素上皮細胞を定法により単離し、培養した。培養液中にFGF2を添加すると、次第に神経マーカーであるtubulinやグリア・マーカーである04、GFAPを発現する細胞が出現し、その割合を増した。この培養系から、神経幹細胞が誘導できることが明らかになった。(2)この幹細胞の培養液中に、FGF2とCNTFを添加したところ、杆体光受容細胞マーカーであるopsin陽性細胞とミュラー細胞マーカーであるvimentin陽性細胞が出現した。さらにDiIラベルした幹細胞とニワトリ初期胚由来の神経性網膜とをaggregation cultureして、retinosphereを作成したところ、opsin陽性細胞体は外顆粒層にあたるsphere最外層に、vimentin陽性細胞体は内顆粒層相当部分に検出できた。vimentin陽性の細胞突起は、最外層である外境界膜相当部分から、最内層の内境界膜相当部分まで検出できた。それぞれの細胞が、網膜内における杆体光受容細胞、ミュラー細胞の本来の位置に形成されることが明らかになった。この実験系では、虹彩色素上皮中に神経幹細胞としての性質を持つ細胞が元来存在するのか、虹彩色素上皮細胞が、神経幹細胞を経て、光受容細胞に分化転換したのかは明らかでない。今後、網膜神経節細胞の作出を目指すと同時に、虹彩組織における幹細胞システムの全容を明らかにしたい。

这项研究的目的是建立一种从眼组织衍生的干细胞系统，用于疾病，其中视网膜神经元经历不可逆的变性，例如视网膜色素和青光眼，并通过产生光感受器细胞和神经节细胞来提供再生治疗。在第一年，获得了以下研究结果：（1）通过常规方法分离出出生后1至第二天的Chick Iris色素上皮细胞并进行培养。当将FGF2添加到培养基中时，表达神经标记细胞蛋白，神经胶质标记04和GFAP的细胞逐渐出现，从而增加了这些比例的比例。该培养系统表明可以诱导神经干细胞。（2）当将FGF2和CNTF添加到干细胞培养基中时，OPSIN阳性细胞（杆阳性细胞是杆状受感受器细胞标记物）和波形蛋白阳性细胞（是Muller细胞标记物）出现的。此外，当培养了培养自鸡胚胎的DII标记的干细胞和神经元视网膜时，会产生一个视网膜层，并且可以在最大的球体外层检测到Opsin阳性细胞体，该细胞最外层的颗粒，该细胞与外部颗粒层相对应，对应于外部颗粒，并将其与内部的粒度相对应。从最外层（最外层的一部分）中检测到波形蛋白阳性细胞突起，相当于最内层的一层，到最内层的一层，最内层的一部分，是最内层的一部分。已经揭示了每个细胞在视网膜内的杆光感受器细胞和muller细胞的原始位置形成。在这个实验系统中，尚不清楚虹膜色素上皮中具有神经干细胞特性的细胞是否存在，或者是否已经通过神经干细胞转化为感光细胞的虹膜色素上皮细胞已被跨分化。将来，我们旨在产生视网膜神经节细胞，同时阐明虹膜组织中干细胞系统的全部程度。