網膜神経節細胞に特異的に発現する分子群の解析

视网膜神经节细胞特异性表达分子的分析

• 批准号: 08771480
• 负责人: 小阪 淳
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771480/
• 关键词: モノクローナル抗体; 網膜神経節細胞; 哺乳類; ウイルスベクター; 外来遺伝子導入; 中枢神経細胞; PC12; Y79; モノクローナル抗体; 網膜神経節細胞; 哺乳類; ウイルスベクター; 外来遺伝子導入; 中枢神経細胞; PC12; Y79

(1)C38分子の機能解析C38分子は、哺乳類において網膜神経節細胞を特異的に標識するモノクローナル抗体C38の抗原分子であり、分子量約22KDaのタンパク質である(Wakabayashi,et al.,1996)。このC38分子について、中枢神経細胞における生理機能の同定を試みた。C38分子はcDNAの一次構造の解析から、中枢神経系に特異的と報告されている分子の相同分子と考えられたが、その生理機能は未だ同定されていない。そこで、私達は、アデノウイルス・ベクターにC38分子のcDNAを組換え、培養細胞及びin vivoレベルの生体において同分子の発現を操作することによって生理機能の同定を試みている。既にC38分子のsenseとantisenseの全長cDNAの組込みに成功し、現在組換え体ウイルスの単離を進行中である。また、本ベクターがどのような細胞種に対して遺伝子導入が可能かどうかの検討も行った。現在までに、LacZを組み込んだアデノウイルス・ベクター(AdexlCALacZ)を使用してPC12、Y79等の神経系培養細胞に外来遺伝子導入と発現が可能であることが判明した。さらに、成熟ラット眼球内に同ウイルスを注入しin vivoレベルにおいても網膜神経層内で外来遺伝子導入が可能であることを見いだした(平成8年度神経眼科学会発表)。(2)網膜神経節細胞を特異的に認識するモノクローナル抗体の大量単離成熟ネコ網膜を材料にして、C38抗体を単離したのと同様に、網膜神経節細胞を認識する新たなモノクローナル抗体の単離を試みている。現在までにF8、B29と名付けた抗体の単離に成功し、染色性の詳細な解析を行っている。中でもB29抗体はラットにおいて蛍光色素の逆行性標識との2重染色により、神経節細胞を標識していることが明らかになった。

（1）C38分子的功能分析C38分子是单克隆抗体C38的抗原分子，该分子在哺乳动物中特异性标记了视网膜神经节细胞，并且是一种分子量约22 kDa的蛋白质（Wakabayashi等，1996年）。我们试图鉴定中枢神经细胞中该C38分子的生理功能。据报道，C38分子与中枢神经系统特有的分子是同源于cDNA的主要结构，但尚未鉴定出其生理功能。因此，我们试图通过将C38分子的cDNA重组为腺病毒载体，并操纵分子在培养的细胞和体内水平中操纵分子的表达来鉴定生理功能。它已经成功地结合了C38分子和反义的全长cDNA，并且目前正在分离重组病毒。我们还研究了基因转移是否可以转移到该载体的哪种细胞类型。迄今为止，已经发现，在培养的神经系统细胞（如PC12和Y79）中，使用腺病毒载体（Adexlcalacz）可以实现外源基因转移和表达。此外，该病毒被注入成熟大鼠的眼睛，并发现在体内水平的视网膜神经层中可以实现外国基因转移（1996年神经嗜血杆菌学会的介绍）。 （2）分离出明确识别视网膜神经节细胞的大规模单克隆抗体，我们正在尝试分离出识别视网膜神经节细胞的新的单克隆抗体，就像将成熟的猫视网膜用作分离C38抗体的材料一样。迄今为止，我们已经成功地分离了名为F8和B29的抗体，并对染色特性进行了详细的分析。其中，据揭示了B29抗体通过逆行标记荧光染料的逆行标记，将大鼠中神经节细胞标记的抗体标记。