棘皮動物オーガナイザー因子の同定

棘皮动物组织因子的鉴定

• 批准号: 14780561
• 负责人: 山本 卓
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780561/
• 关键词: 棘皮動物; オーガナイザー; ウニ; 分泌性因子; 誘導

昨年シグナル配列トラップ法により選別した560個の酵母のクローンから、プラスミドDNAをPCR法により調製し、すべての塩基配列を決定した。塩基配列からシグナル配列を含むN末端のアミノ酸配列を予測し、その配列がシグナル配列である可能性をPsort programにより調べた。その結果、約50%クローンがシグナル配列を含む可能性が示され、酵母によるシグナル配列のスクリーニングは成功していることがわかった。さらに、その配列を用いてBlast searchにより既知の塩基配列との相同性を調べたところ、既知の分泌性酵素あるいは未知の分泌因子cDNAクローンとの相同性が確認された。これらのクローンのステージ別の発現量を調べるため、cDNAのPCR断片をフィルターにプロットしたマクロアレイフィルターを複数枚作製中である。また、プローブ用の各ステージ(未孵化胞胚期、間充織胞胚期、原腸胚期)の総RNAについてはすべてのステージで調製した。発現の局在を調べるために、解離した小割球特異的および大・中割球特異的なプローブについても合わせて調製した。シグナル配列トラップ法でクローニングできるのは、タンパク質のN末端部分のみである。そのため、解析を進めていくために、全長cDNAをクローニングする必要がある。本年度は、孵化胞胚期と原腸胚期のRNAからそれぞれ約1000万の独立したcDNAクローンを含むプラスミドcDNAライブラリーを作製した。現在このライブラリーを用いて、興味深いクローンの全長cDNAをスクリーニングしている。

质粒DNA是通过PCR从去年通过信号序列捕获方法选择的560个酵母克隆制备的，并确定了所有碱基序列。从基本序列预测了包含信号序列的N末端的氨基酸序列，并使用PSORT程序检查了序列为信号序列的可能性。结果表明，大约50％的克隆可能包含信号序列，而酵母对信号序列进行筛选已经成功。此外，当使用该序列通过BLAST搜索研究已知的碱基序列的同源性时，可以证实它与已知的分泌酶或未知的分泌因子CDNA克隆同源。为了通过阶段检查这些克隆的表达水平，目前正在准备多个宏观阵列过滤器，其中将PCR片段绘制为cDNA的PCR片段。此外，在各个阶段都制备了探针（未接触的囊肿，间充质囊肿，胃胃）的每个阶段的总RNA。还准备解散的微生物特异性和大型特异性探针以检查表达的定位。只能通过信号序列捕获来克隆蛋白质的N末端部分。因此，为了进行分析，有必要克隆全长cDNA。今年，我们创建了一个质粒cDNA文库，其中包含来自孵化胚和胃阶段中RNA的大约1000万个独立的cDNA克隆。该库目前正在用于筛选有趣的克隆的全长cDNA。

项目成果

Yazawa, T., Nakayama, Y., Fujimoto, K., Matsuda, Y., Yamamoto, T.: "Abnormal Spermatogenesis at Low Temperatures in the Japanese Red-bellied Newt, Cynops pyrrhogaster : Possible Biological Significance of the Cessation of Spermatocytogenesis"Mol Reprod De

Yazawa，T.，Nakayama，Y.，Fujimoto，K.，Matsuda，Y.，Yamamoto，T.：“日本红腹蝾螈，Cynopspyrrhogaster在低温下的异常精子发生：精子细胞发生停止的可能生物学意义

Kurita M., Kondoh H., et al.: "Utilization of a particle gun DNA introduction system for the analysis of cis-regulatory elements controlling the spatial expression pattern of the arylsulfatase gene (HpArs) in sea urchin embryo"Development Genes and Evolut

Kurita M.、Kondoh H. 等人：“利用粒子枪 DNA 导入系统分析控制海胆胚胎中芳基硫酸酯酶基因 (HpArs) 空间表达模式的顺式调控元件”发育基因和进化