Funicone類によるアゾール系抗真菌剤活性増強機構の解明

阐明 Funicones 增强唑类抗真菌药物活性的机制

• 批准号: 14780464
• 负责人: 荒井 雅吉
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780464/
• 关键词: 抗真菌剤; 活性増強物質; Actofunicone; 深在性真菌症; miconazole; Candida albicans; Miconazole; バイオプローブ

アゾール系抗真菌剤の活性増強物質として発見した新規化合物actofuniconeおよびその類縁化合物deoxyfunicone、vermistatin、NG-012の作用メカニズムの解析を目的に、以下の検討を行った。また前年度までの知見により、薬剤排出機構が新たな薬剤標的となることが明らかとなって来たことから、薬剤排出機構を標的とするスクリーニングを実施した。1.二次元電気泳動法を用いた作用部位の解明前年度までの病原真菌C.albicansを使用したプロテオーム解析により、deoxyfunicone処理の場合のみに変動するタンパク質を銀染色レベルで20種類見い出した。今年度はこれらタンパク質の同定のため、CBB染色での検出可能レベルまでタンパク質量を増加し、タンパク質の同定を試みた。その結果、CBB染色レベルでの検出が可能となったタンパク質は20種類のうち4種であった(スポット1,2,3および4)。このうちスポット1および2について、アミノ酸シークエンス解析を実施したが、N末端が修飾されている可能性により、同定までには至らなかった。現在MALDI-TOF Massを使用しての同定を試みている。2.S.cerevisiae変異株を用いた標的分子の解析変異株ライブラリーの作成は終了した。来年度はこれらライブラリーからのdeoxyfunicone耐性株の選択を実施する。3.薬剤排出を標的するスクリーニング系の構築前年度、宮川都吉博士(広島大)より分与されたpdr5欠損酵母を利用した化合物評価を実施した結果、beauvericinおよび4種類の新規beauvericin類縁化合物を発見した。

进行以下研究来分析作为唑类抗真菌剂活性增强剂发现的新化合物 Actofunicone 及其相关化合物 deoxyfunicone、vermistatin 和 NG-012 的作用机制。另外，根据前一年的研究结果，明确药物排泄机制是一个新的药物靶点，因此我们针对药物排泄机制进行了筛选。 1. 利用二维电泳阐明作用部位通过截至前一年使用病原菌白色念珠菌进行的蛋白质组分析，我们发现银染水平上仅在脱氧福尼康处理时发生变化的 20 种蛋白质。今年，为了鉴定这些蛋白质，我们将蛋白质含量增加到可以通过CBB染色检测到的水平，并尝试鉴定这些蛋白质。结果，20 种蛋白质中有 4 种可在 CBB 染色水平上检测到（点 1、2、3 和 4）。其中，对点1和点2进行了氨基酸序列分析，但由于N末端可能被修饰而无法鉴定。我们目前正在尝试使用 MALDI-TOF Mass 来识别它。 2.利用酿酒酵母突变株进行靶分子分析突变株库的创建已经完成。明年，我们将从这些库中选择脱氧福尼酮抗性菌株。 3. 构建针对药物排泄的筛选系统 去年，使用宫川藤吉博士（广岛大学）提供的 pdr5 缺陷酵母对化合物进行评估，结果发现了白僵菌素和四种新的白僵菌素相关化合物 I。发现了它。

项目成果

Fukuda, T: "New Beauvercin, Potentiators of Antifungal Miconazole Activity, Produced by Beauveria sp. FKI1366 I."J.Antibiot.. 57. 100-116 (2004)

Fukuda，T：“新的Beauvercin，抗真菌麦康是活性的增强剂，由Beauveriasp。fki1366I.产生。

Fukuda, T: "New Beauvercin, Potentiators of Antifungal Miconazole Activity, Produced by Beauveria sp. FKI1366 II."J.Antibiot.. 57. 117-124 (2004)

Fukuda，T：“新的Beauvercin，抗真菌麦康是活性的增强剂，由BeauveriaSp。Fki1366II产生，J.Antibiot .. 57. 117-124（2004）