スフィンゴミエリナーゼ阻害剤をバイオプローブとした細胞機能の解析

使用鞘磷脂酶抑制剂作为生物探针分析细胞功能

• 批准号: 12780444
• 负责人: 荒井 雅吉
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Kitasato University (2001)Kitasato Institute (2000)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780444/
• 关键词: スフィンゴミエリナーゼ; 阻害剤; バイオプローブ; 微生物; 二次代謝産物; スフィゴミエリナーゼ

平成13年度は、酵素アッセイによる中性および酸性スフィンゴミエリナーゼ(SM)阻害剤の探索を継続するとともに、ヒトTリンパ球系癌細胞であるJurkat細胞を用いて、中性SM特異的阻害物質として見い出されたchlorogentisylquinoneの細胞レベルでめSM阻害作用を評価した。土壌などから分離した放線菌、糸状菌およびバクテリアの培養液を対家に約3000サンプルについてスクリーニングを行った。その結果、一糸状菌、FO-7436株より抗生物質として報告されているalutenusinが選択された。本化合物は中性SMに対して、IC50値で41.3μMを示し、酸性SMに対しては、350μMまで阻害活性を示さなかった。またこの阻害活性は非可逆的な阻害であることが示唆された。しかしながら今回のスクリーニングでは酸性SMを特異的に阻害する化合物は得られなかった。一方、chlorogentisylquinoneをバイオプローブとし、SMを介するシグナル伝達の解明を行うことを目的に、Jurkat細胞を用いた細胞評価系を構築した。本年度はまずchlorogentisylquinoneのJurkat細胞に対する細胞毒性およびSM阻害活性を検討した。MTT法により、薬剤添加から20時間後の細胞毒性を評価したところ、chlorogentisylquinoneは50μMまで細胞毒性を示さなかった。しかしSM阻害活性を測定したところ、30μMまではSMの活性を阻害できなかった。chlorogentisylquinoneは中性SMに特異的であることから、現在、より特異性の高い細胞評価系を構築中である。

2001财年，我们继续使用酶法寻找中性和酸性鞘磷脂酶（SM）抑制剂，并使用人类T淋巴细胞Jurkat细胞作为中性SM特异性抑制剂，发现了氯龙胆醌的SM抑制效果。在细胞水平上进行评估。对从土壤中分离出的放线菌、丝状真菌和细菌的培养液样本进行了大约 3,000 个样品的筛选。结果，从单丝真菌菌株FO-7436中选出了已报道为抗生素的alutenusin。该化合物对中性 SM 的 IC50 值为 41.3 μM，对高达 350 μM 的酸性 SM 无抑制活性。还表明这种抑制活性是不可逆的。然而，该筛选并未产生任何特异性抑制酸性 SM 的化合物。另一方面，使用氯龙胆醌作为生物探针，我们利用Jurkat细胞构建了细胞评估系统，旨在阐明SM介导的信号转导。今年，我们首先研究了氯龙胆醌对 Jurkat 细胞的细胞毒性和 SM 抑制活性。当添加药物20小时后使用MTT法评估细胞毒性时，氯龙胆醌在高达50μM时不表现出细胞毒性。然而，当测量SM抑制活性时，SM活性不能被抑制到30μM。由于氯龙胆醌是中性SM所特有的，因此我们目前正在构建更特异的细胞评价体系。

项目成果

Uchida, R.: "Chlorogentisylquinone, a new neutral sphingomyelinase inhibitor, produced by a marine fungus"Journal of Antibiotics. 54. 882-889 (2001)

Uchida, R.：“氯原基醌，一种新型中性鞘磷脂酶抑制剂，由海洋真菌产生”抗生素杂志。

Yamaguchi, Y.: "Phoma sp. FOM-8108, a producer of gentisylquinones, isolated from sea sand"Mycoscience. (in press). (2002)

Yamaguchi, Y.：“Phoma sp. FOM-8108，一种龙胆基醌的生产者，从海沙中分离出来”Mycoscience。