ヒストンアセチル化誘導剤による頭頸部癌分化誘導療法

使用组蛋白乙酰化诱导剂进行头颈癌分化诱导治疗

基本信息

批准号：
14771157
负责人：
表原文江
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では頭頸部癌分化誘導療法の開発を目指し,分化誘導剤ベスナリノンによるp21waf1およびTSC-22遺伝子の転写調節機構を解明を行った。まず,p21wafl遺伝子プロモーターのベスナリノン反応性領域の検索を行った。種々の長さのp21waf1遺伝子プロモーターを含むルシフェラーゼレポータープラスミドを用いた検索により,プロモーター領域のTATA Box上流の-168 bpから-13 bpの領域にべスナリノン反応性領域が存在することを明らかにした。次に,p21waf1遺伝子の転写活性化に関与する転写因子の同定をゲルシフトアッセイにより行った。その結果,ベスナリノン処理によりp21waf1遺伝子プロモーター領域に存在する6個のSp1サイトのうち,最も上流に存在するSp1-1とそのすぐ下流に存在するSp1-2サイトに転写因子Sp1およびSp3の結合することが明らかとなった。さらに,その転写調節にはヒストンアセチル化が関与しており,ベスナリノンによるp21waf1遺伝子の転写制御において,、DNA結合性転写因子Sp1およびSp3と相互作用する何らかのコアクチベーターの存在している可能性が示唆された。続いてTSC-22遺伝子をクローニングし,構造決定を行った。ヒトTSC-22遺伝子は3つのエキソンよりなり,蛋白読み取り枠は全エキソンにまたがって存在していた。TATA BoxはそのmRNAのサイズより2116に存在する(CATATATTTGC)が最も可能性の高いこと,また,転写開始点はTATA boxより7 bp下流の2126および29bp下流の2148に存在することが明らかとなった。TATA box上流約 2.1kbのプロモーター領域には多くの転写因子反応性領域が存在した。このプロモーター領域を用いてルシフェラーゼアッセイを行ったところベスナリノン,all trans-retinoic acid, dibutyryl cyclic AMP などの分化誘導作用を有する薬剤により転写活性化が認められた。ベスナリノンは,TYS細胞において転写因子Sp1,Sp3を活性化させ,ヒストンアセチル化を誘導することによりp21waf1遺伝子を転写活性化することが明らかとなった。またTSC-22遺伝子もベスナリノンにより直接の転写活性化を受けることが示された。

在本研究中，我们旨在开发头颈癌分化诱导疗法，并阐明分化诱导剂维纳里酮对p21waf1和TSC-22基因的转录调控机制。首先，我们寻找 p21wafl 基因启动子的 vesnarinone 响应区域。使用含有不同长度的 p21waf1 基因启动子的荧光素酶报告质粒进行搜索，发现启动子区域 TATA Box 上游的 -168 bp 至 -13 bp 区域中存在维纳里酮反应区域。接下来，通过凝胶转移分析鉴定了参与 p21waf1 基因转录激活的转录因子。结果，通过维纳里酮处理，转录因子Sp1和Sp3与p21waf1基因启动子区域中的6个Sp1位点中最上游的Sp1-1位点和紧下游的Sp1-2位点的结合变得清晰。此外，组蛋白乙酰化参与其转录调控，并且表明vesnarinone对p21waf1基因的转录调控中可能存在一些与DNA结合转录因子Sp1和Sp3相互作用的共激活因子。随后，克隆了TSC-22基因并确定了其结构。人类TSC-22基因由三个外显子组成，蛋白质阅读框跨越所有外显子。根据mRNA的大小，TATA盒最有可能位于2116（CATATATTTGC），转录起始位点位于TATA盒下游7bp的2126和下游29bp的2148。塔。 TATA盒上游约2.1kb的启动子区存在许多转录因子响应区。当使用该启动子区域进行荧光素酶测定时，观察到具有分化诱导作用的药物（例如维纳里酮、全反式视黄酸和二丁酰环AMP）的转录激活。研究表明，vesnarinone 通过激活转录因子 Sp1 和 Sp3 并诱导 TYS 细胞中的组蛋白乙酰化来转录激活 p21waf1 基因。 TSC-22 基因也被证明可以被 vesnarinone 直接转录激活。