食道表在癌においてマリンパ節転移を制御する因子の同定

浅表性食管癌海洋淋巴结转移控制因素的鉴定

基本信息

批准号：
15790356
负责人：
藤田幹夫
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

食道扁平上皮癌のリンパ節転移に関連する因子のスクリーニングに,食道癌培養細胞T.Tn (Sakai et al.Int.J.Oncol, 2002)を用いた.まず,in vitroにおいてT.Tn細胞から遊走能の高い細胞,あるいは細胞-細胞間,細胞-基質間の接着能の高い細胞をクローニング後,ヌードマウス同所性移植モデル(Furihata et al.Int.J.Oncol, 2001)を用いて,リンパ節転移を示す亜株T.Tn-AT1を分離した.次に,T.Tn細胞とT.Tn-AT1細胞における遺伝子発現の違いを9206個の遺伝子をスポットしているCodeLink Bioarray (Motorola)を用いて検索した.予想された通り両細胞の遺伝子発現は類似しており,3倍以上の発現の差が認められた遺伝子はわずか34個であった.34遺伝子のうち29個はT.Tn-AT1において発現が低下しており,5個は発現が上昇していた.34遺伝子のうち,その発現の差が顕著であり,浸潤転移に関与が高いと考えられた14遺伝子に関して半定量RT-PCRを行い,その発現の差を確認した.その結果9遺伝子(KAL1,HPGD,NDN,REG1A,CXCR4,SPOCK,DIAPH2,AIF1,VNN2)にマイクロアレイと同様の結果が得られた.これら9遺伝子は,それぞれ細胞接着,遊走,炎症,増殖,分化に関る遺伝子であり,転移過程で重要な役割を果たしていると考えられた.このようなマイクロアレイによるスクリーニングで得られた分子のうちCXCR4についての解析を進めた.ヒト食道扁平上皮癌の手術検体を用いた免疫組織化学では,非腫瘍部の基底層,腫瘍先進部や脈管侵襲部位の一部において蛋白の核内発現が観察された.

培养的食管癌细胞T.Tn (Sakai et al. Int. J. Oncol, 2002)克隆出具有高迁移能力的细胞或具有高细胞迁移能力的细胞后，用于筛选与食管鳞状细胞癌淋巴结转移相关的因子。细胞或细胞与基质的粘附能力，我们使用裸鼠原位移植模型（Furihata 等人 Int. J. Oncol， (2001)，我们分离了一个显示淋巴结转移的亚系 T.Tn-AT1。接下来，我们通过点样 CodeLink Bioarray 的 9206 个基因发现了 T.Tn 细胞和 T.Tn-AT1 细胞之间基因表达的差异。（摩托罗拉）。正如预期的那样，两种细胞中的基因表达相似，只有 34 个基因的表达存在 3 倍或更多的差异。34 个基因中的 29 个基因的 T.Tn-AT1 表达下降。 T.Tn-AT1 中 5 的表达降低。在34个基因中，表达差异显着，并且14个基因被认为与侵袭和转移高度相关，进行半定量RT-PCR以证实9个基因（KAL1、HPGD、NDN、 REG1A、CXCR 4（SPOCK、DIAPH2、AIF1和VNN2）获得了与微阵列结果类似的结果，这9个基因分别与细胞粘附、迁移、炎症、增殖和分化相关，并在转移过程中发挥重要作用。本来以为这种在通过微阵列筛选获得的分子中，我们利用人食管鳞状细胞癌的手术标本进行了CXCR4的分析，结果显示在非肿瘤区域的基底层、晚期肿瘤区域和血管侵犯部位中均被检测到。在某些情况下，观察到蛋白质的核表达。