網膜神経節細胞特異的な免疫毒素を用いた新しい緑内障モデルの確立

利用视网膜神经节细胞特异性免疫毒素建立新型青光眼模型

• 批准号: 14770945
• 负责人: 東出 朋巳
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770945/
• 关键词: 網膜; 免疫毒素; 緑内障; ラット

免疫毒素硝子体内注入モデルの作成アポトーシスによる細胞死を来たすリボゾーム不活性化タンパクであるSaporinと網膜神経節細胞(GC)に特異的なThy-1,に対する抗体を結合した免疫毒素(OX7-SAP)5μgをBrown Norwayラットの片眼の硝子体内に投与した。対照として抗ヒトIgG抗体10μg、抗Thy-1抗体2.5μgおよびSaporinを硝子体内投与した。1)硝子体内投与7日後に眼球摘出し、4%パラフォルムアルデヒドで固定し、網膜の凍結切片を作成した。OX7-SAP、抗ヒトIgG抗体、抗Thy-1抗体を投与した眼には、著明な網膜障害はみられなかったが、Saporin 5μgあるいは0.5μgを投与した眼には、特に視細胞に著明な変性がみられた。Saporinが視細胞に取り込まれる際の結合タンパクの同定を試みたが困難であった。2)抗Thy-1抗体とFITC標識による免疫染色において、OX7-SAP投与眼においてのみ網膜神経節細胞層(NFL)の蛍光の減弱がみられた。3)硝子体内投与1ヶ月後、走査レーザー検眼鏡(SLO)にて投与眼のNFLの反射の減弱がみられた。1)、2)、3)からOX7-SAPのラット硝子体内投与によって、GC選択的な網膜障害モデルを作成できる可能性が示された。他のGC障害モデルとの比較慢性高眼圧モデルは、トノペンなど種々の方法を試したが、眼圧測定の信頼性が低かったため評価できなかった。網膜虚血再灌流モデルでは、1週後にSLOにてびまん性で顕著なNFLの脱落がみられた。視神経挫滅モデルでは、1週後にはSLOにて明らかなNFLの変化はみられなかったが、2週目以降進行性でびまん性のNFLの脱落がみられた。今後、SLOなどを用いて免疫毒素硝子体内注入モデルと他のGC障害モデルでのNFLやGCの障害過程やそれに対する神経保護の可能性を明らかにしていく予定である。

一种结合了皂苷的抗体的免疫毒素，这是一种灭活的蛋白质，可通过免疫毒素玻璃体模型和视网膜神经节细胞（GC）凋亡引起细胞死亡。 。相比之下，抗thy-1抗体2.5μg和皂苷在玻璃体内给予抗IgG抗体，抗THY-1抗体2.5μg。 1）在玻璃体中宣传七天后，将眼睛移开，并创建了一个冷冻的视网膜，以用4％的para甲醛修复。施用OX7-SAP，抗命中IgG抗体和抗THY-1抗体的眼睛对于视网膜疾病不显着，但是在施用Saporin5μg或0.5μg的眼睛中，尤其是在视觉细胞中。 。当将糖蛋白掺入视觉细胞中时，很难识别结合蛋白。 2）带有FITC符号的抗THY-1抗体和免疫集染色显示仅在OX7-SAP的OX7-SAP给药中，视网膜节点细胞层（NFL）的荧光。 3）玻璃体内部给药后一个月，在扫描激光检查（SLO）中减少了施用眼睛的NFL的反射。据表明，GC选择性视网膜疾病模型可以由1），2）和3）的OX7-SAP给药而创建。由于眼内压力测量的可靠性较低，因此无法评估与其他GC残疾模型（例如Tonopen）的慢性高血压模型的比较。一周后，视网膜缺血重新灌注模型在SLO中是显着的。一周后，SLO没有明显的NFL变化，但是在第二周之后，NFL丢失了。将来，我们计划阐明免疫毒素-Vitor -Vitro -In -In -In -In -In -In -In -Vehicle注射模型和其他GC疾病模型等NFL和GC疾病的可能性。