CD9の機能解析とアンチセンスCD9遺伝子導入による新しい胃癌遺伝子治療の研究

CD9的功能分析及反义CD9基因导入的新型胃癌基因治疗研究

• 批准号: 13770726
• 负责人: 宮城 委史
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770726/
• 关键词: CD9; アデノウイルスベクター; 胃癌; Invasion Assay; 腹膜転移モデル

CD9の発現はHB-EGF、α3β1と共に細胞-細胞間の刺激伝達に関与している。この伝達関与により細胞増殖作用を促進することより、癌の進展や転移に関与している事が示唆される。前年度の実験では、3種の胃癌細胞株MKN-1、MKN-28、MKN-45を用いてセンスおよびアンチセンスCD9アデノウイルスベクターをそれぞれ感染させCD9蛋白の発現をWestern blot法にて確認した結果、いずれの癌細胞株でも強発現が確認された。本年度はセンス・アンチセンスCD9の導入において腹腔内増殖・抑制による腹膜転移への関与についてIn vitroおよびIn vivoにおいて検討した。浸潤能に影響があるかInvasion Assayを行い検討した。non-virus群とアンチセンスCD9発現癌細胞株を比較して、浸潤細胞数に有意な変化は示さなかったことよりCD9の発現抑制が直接浸潤抑制または促進に関与しないと考えられた。さらに胃癌細胞株MKN-45よりヌードマウスの高度腹膜転移モデル(MKN-45P)を作製し、高度腹膜転移細胞株にセンスおよびアンチセンスCD9アデノウイルスベクターを感染させIn vivo実験に用いた。センスおよびアンチセンスCD9導入MKN-45Pをヌードマウス腹腔内に散布しその効果について検討した。腹腔内散布後4週後の腹膜転移結節数についてNon-virus群、CD9導入群、アンチセンスCD9導入群で比較した。有意差は認められなかったがCD9導入群はNon-virus群に比べ結節数の増加がみられ、アンチセンスCD9導入群ではNon-virus群に比べ結節数が少なかった。この結果よりアンチセンスCD9の癌細胞への導入は、CD9の細胞増殖作用を抑制し、高度腹膜転移モデルの結節数減少をもたらしたと推察する。今後、腹膜転移の治療に応用できる可能性を示唆した。

CD9 的表达与 HB-EGF 和 α3β1 一起参与细胞间刺激的传递。这种传播参与促进细胞增殖，表明它参与癌症进展和转移。去年的实验中，用正义和反义CD9腺病毒载体感染三种类型的胃癌细胞系MKN-1、MKN-28和MKN-45，并使用Western blot方法证实CD9蛋白的表达。结果，在所有癌细胞系中均证实了强表达。今年，我们在体外和体内研究了正义/反义 CD9 通过腹膜内增殖和抑制参与腹膜转移。进行侵袭测定以检查是否对侵袭能力有影响。比较非病毒组和表达反义CD9的癌细胞系，浸润细胞的数量没有显着变化，表明抑制CD9表达并不直接参与抑制或促进侵袭。进一步，以胃癌细胞系MKN-45为原料，建立重度腹膜转移裸鼠模型（MKN-45P），将重度腹膜转移细胞系感染正义和反义CD9腺病毒载体，用于体内实验。 。将引入CD9的正义和反义MKN-45P腹腔注射至裸鼠并研究其效果。比较非病毒组、CD9导入组和反义CD9导入组腹腔播散后4周的腹膜转移结节的数量。虽然没有观察到显着差异，但与非病毒组相比，CD9导入组中的结节数量增加，并且反义CD9导入组中的结节数量低于非病毒组。从这个结果我们推断，将反义CD9引入癌细胞抑制了CD9的细胞增殖作用，导致晚期腹膜转移模型中结节数量减少。结果表明，该方法未来可能应用于腹膜转移瘤的治疗。