LIMキナーゼ遺伝子の心臓発生過程における機能的役割の解析

LIM激酶基因在心脏发育过程中的功能作用分析

基本信息

批准号：
13770348
负责人：
高橋知之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
若手研究(B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770348/
关键词：
LIMキナーゼ心臓サルコメアアクチン細胞骨格分化

项目摘要

<研究の目的>近年、発生工学的手法の発展により、心筋細胞の発生・分化を惹起する増殖因子や転写因子の機能的役割の解析が急速に進んでいるが、サルコメアをはじめとする心筋細胞特異的な分化形態形成メカニズムについては未だ未解明の部分がほとんどである。本研究ではアクチン細胞骨格を制御するLIMキナーゼ(LIMKs)の心臓・心筋細胞の発生・分化過程における機能的役割を解析する事により、心筋細胞の分化形態であるサルコメア形成過程を中心に心臓の発生・分化機構を解明する事が目的である。<研究実績の概要>1.心筋細胞の初代培養系ならびにES細胞による心筋細胞分化系の確立を行い、アデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入による遺伝子機能解析の可能性を検討した。2.免疫プロットやRT-PCRにより、心筋細胞の初代培養系ならびにES細胞による心筋細胞分化系におけるLIMKsの発現解析を行った。3.野生型LIMKsならびに変異型LIMKsの発現アデノウイルスベクターの作製を行った。さらに変異型LIMKsの強制発現により、ES細胞の心筋分化(サルコメア形成)に及ぼす影響を検討した。4.種々の変異型LIMKs遺伝子導入により、LIMKsの成熟心筋細胞の機能発現に及ぼす影響についての解析を行った。5.アンギオテンシンII等で代償性心肥大を誘導したin vitroの心筋細胞障害モデルにおけるLIMKsの発現・活性解析を行った。6.種々の心疾患モデル動物におけるLIMKsの発現・活性解析を行った。

<研究的目的>近年来，发展工程技术的发展导致对诱导心肌细胞发育和分化的生长因子和转录因子的功能作用的快速分析，但是大多数心肌细胞特异性分化形态发生的机制，包括萨科雷在内，尚未理解。这项研究旨在通过分析调节肌动蛋白细胞骨骼的功能作用，在心脏和心脏分化中调节肌动蛋白细胞骨骼的功能作用，旨在阐明心脏发育和分化的机制，侧重于肌膜形成的过程，这是心肌细胞分化的形式。 <研究结果摘要> 1。我们使用心肌细胞和ES细胞的原代培养物建立了心肌细胞分化系统，并使用腺病毒载体检查了基因转移的基因功能分析的可能性。 2。通过免疫学和RT-PCR分析了ES细胞中心肌细胞和心肌细胞分化的原发性培养物的表达。 3。制备了野生型lim型和突变型lim型腺病毒载体的表达。此外，研究了突变型肢体强迫表达对ES细胞心肌分化（肉瘤形成）的影响。 4。通过引入各种突变型肢体基因，通过引入各种突变体基因对成熟心肌细胞的功能表达的影响。 5。我们在体外心肌细胞损伤模型中分析了四肢的表达和活性，其中用血管紧张素II和其他因素诱导代偿性心脏肥大。 6。分析了心脏病的各种动物模型中的四肢的表达和活性。