SV40トランスフォ-ム細胞特異的膜タンパク質cDNAの分離とその機能

SV40转化细胞特异性膜蛋白cDNA的分离及其功能

基本信息

批准号：
02152024
负责人：
山口宣生
金额：
$ 4.1万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

浸潤・転移・異常増殖など癌細胞特有な形質は、細胞膜の変化に起因すると考えられる。したがって、癌細胞膜に特異的に発現するタンパク質の遺伝子を単離してその機能を解析することは、発癌機構の理解のみならず癌の診断・治療において重要である。DNA型腫瘍ウイルス・SV40でトランスフォ-ムした細胞には、移植拒否抗原など多くの膜表面抗原が出現する。本研究は、SV40トランスフォ-ム細胞に特異的な膜タンパク質cDNAの単離とその機能解析を目的としている。SV40トランスフォ-ムハムスタ-細胞の特異的膜抗原に対するモノクロ-ナル抗体(25Ab)を用いて、抗原タンパク質のcDNAクロ-ニングを試みた。SV40トランスフォ-ム細胞の25Ab抗原量をFACSで測定し、同抗原を大量に発現するハムスタ-細胞・B6株を分離した。25Abを用いてB6細胞とCOS細胞のパニングを行った結果、B6細胞のみが選択的に濃縮される。これはCOS細胞と25Abを組み合わせるパニングで目的の抗原遺伝子cDNAの分離が可能であることを示している。そこで、我々の開発した動物細胞発現ベクタ-を用いて作製したB6細胞cDNAライブラリ-(鎖長1.5kb以上で約900万の独立なクロ-ンからなる)をCOS細胞に遺伝子導入して25Abによるパニングを行なっている。さらにB6細胞を用いて膜抗原に対するポリクロ-ナル抗体の作製を行った。これを用い25Ab以外の特異的膜抗原cDNAの単離を予定している。トランスフォ-ム細胞に特異的な膜タンパク質cDNAの網羅を目的として、CD4やヒトILー2受容体抗原決定基をアミノ末端側にもつキメラcDNAライブラリ-をSV40トランスフォ-ムラット細胞のmRNAから作製し、cDNA迅速検索法やパニング法で膜タンパク質をコ-ドするcDNAのスクリ-ニングを行っている。

癌细胞特有的特征，如侵袭、转移和异常生长，被认为是由细胞膜的变化引起的。因此，分离癌细胞膜中特异表达的蛋白质基因并分析其功能不仅对于了解致癌机制而且对于癌症的诊断和治疗都很重要。许多膜表面抗原，包括移植排斥抗原，出现在用 DNA 肿瘤病毒 SV40 转化的细胞中。本研究的目的是分离SV40转化细胞特异的膜蛋白cDNA并分析其功能。使用针对 SV40 转化仓鼠细胞的特定膜抗原的单克隆抗体 (25Ab)，我们尝试了抗原蛋白的 cDNA 克隆。通过FACS测量SV40转化细胞中25Ab抗原的量，并分离大量表达相同抗原的B6仓鼠细胞株。使用25Ab淘选B6细胞和COS细胞的结果是，仅B6细胞被选择性富集。这表明通过COS细胞和25Ab组合的淘选可以分离出靶抗原基因cDNA。因此，我们引入了使用我们开发成COS细胞的动物细胞表达载体创建的B6细胞cDNA文库（由约900万个链长为1.5 kb或更长的独立克隆组成），并使用25Ab介导的基因表达载体正在进行平移。此外，我们使用 B6 细胞生产了针对膜抗原的多克隆抗体。我们计划用它来分离除 25Ab 之外的特定膜抗原 cDNA。为了覆盖转化细胞特异的膜蛋白cDNA，我们从SV40转化大鼠细胞的mRNA构建了氨基末端具有CD4和人IL-2受体抗原决定簇的嵌合cDNA文库，我们现在正在使用编码膜蛋白的cDNA进行筛选。 cDNA快速搜索方法和淘选方法。

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Functional analysis of a NAC-type transcription factor OsNAC6 involved in abiotic and biotic stress-responsive gene expression in rice.

NAC型转录因子OsNAC6参与水稻非生物和生物胁迫响应基因表达的功能分析。

DOI：
10.1111/j.1365-313x.2007.03168.x
发表时间：
2007-06-22
期刊：
The Plant journal : for cell and molecular biology
影响因子：
0
作者：
K. Nakashima;L. Tran;Dong Van Nguyen;M. Fujita;K. Maruyama;D. Todaka;Yusuke Ito;N. Hayashi;K.
通讯作者：
K.