増殖因子受容体情報伝達系をタ-ゲットとしたrasp21の新しい作用ドメインの解析

靶向生长因子受体信号转导系统的rasp21新作用域分析

• 批准号: 03152030
• 负责人: 村山 芳武
• 金额: $ 3.2万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152030/
• 关键词: ras蛋白; 温度変異株; トランスフォ-ム; IGFーII受容体; Gi_2; コロニ-形成; 静止期; カルシウム流入

本年度は、第1にras蛋白が、IGF受容体シグナル伝達系をタ-ゲットとして働くことを明らかにする為に、温度変異株のvーrasを発現したBALB/Cー3T3細胞(tsKiーras細胞)を用いた実験を行った。この細胞は、40℃では親株の細胞と同じに挙動し、37℃への変換で、ras作用によりトランスフォ-ムすることが知られている。40℃で静止状態としたts細胞は、PDGFとEGFの処理で、IGFーIIによるカルシウムの流入を煮起した。40℃の細胞を、37℃に変換すると、それだけで細胞は、IGFーIIに対してカルシウム流入を煮起した。このとき、Gi_2の活性は、40℃ではIGFーIIによって煮起されないが、ras作用の発現と共に煮起された。以上の事実は、静止期細胞では、IGFーII受容体とGi_2間が脱共役しており、rasの活性化は、両者を共役状態に変えることを示している。すなわち、rasは、IGFーII受容体、Gi_2のいづれかに働いて、機能することが明らかとなった。第2に、以上の結果をふまえて、rasのIGFーII受容体ーGi_2共役活性化作用が、細胞の癌化作用の主因か否かを明らかとする為に、ts細胞が、37℃で軟寒天中にコロニ-をつくる機能に及ぼすIGFの効果を調査した。ts細胞は、40℃では全く、又37℃でも血清非存在下にはコロニ-を形成しなかった。コロニ-形成能に及ぼす効果は、血清と乏血小板血漿とで差がなかったため、PDGFがras作用に要求されることはないと判明した。しかし、下垂体摘除ラット由来の乏血小板血漿では、全くts細胞はコロニ-を形成しえなかった。このことは、ras蛋白はIGFシグナル系に働いて、細胞を癌化させていることを示している。今後、再構成のin vitroの系において、rasあるいはその連関蛋白の作用を同定してゆきたい。

今年，我们首先研究了表达温度突变体v-ras的BALB/C-3T3细胞（tsKi-ras细胞）进行了实验。已知该细胞在 40°C 时的行为与亲代细胞相同，当温度变为 37°C 时，它会通过 ras 作用发生转变。用 PDGF 和 EGF 处理在 40°C 下保持静止状态的 TS 细胞，以刺激 IGF-II 诱导的钙流入。将细胞从 40°C 转移至 37°C 仅刺激细胞对 IGF-II 产生钙流入反应。此时，Gi_2活性不受40°C下IGF-II的刺激，而是随着ras作用的开始而受到刺激。上述事实表明，在静止细胞中，IGF-II受体和Gi_2是解偶联的，ras的激活使它们变为偶联状态。换句话说，表明ras通过作用于IGF-II受体或Gi_2而发挥功能。其次，基于上述结果，为了明确ras的IGF-II受体-Gi_2偶联激活作用是否是细胞癌变的主要原因，我们在37℃下测试了ts细胞中IGF对能力的影响。研究了软琼脂中的菌落形成情况。 TS 细胞在 40°C 下不形成任何集落，在没有血清的情况下在 37°C 下也不形成集落。血清和贫血小板血浆对集落形成能力的影响没有差异，表明 ras 作用不需要 PDGF。然而，没有 TS 细胞能够在垂体切除大鼠的贫血小板血浆中形成集落。这表明ras蛋白作用于IGF信号系统导致细胞癌变。将来，我们希望确定 ras 或其相关蛋白在体外重建系统中的作用。