HCV感染チンパンジーに対するHCVDNAワクチンの効果に関する研究

HCV DNA疫苗对HCV感染黑猩猩的作用研究

• 批准号: 13670505
• 负责人: 福田 吉秀
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13670505/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; DNAワクチン; E2; NS3

C型慢性肝炎の進展阻止には、C型肝炎ウイルス(HCV)の駆除を目的としたインターフェロン治療が最も有効な手段であるが、HCVRNAの排除には限界がある。種々のウイルス感染に対して、これまで多くのワクチンが開発されてきたが、HCVに関しては、中和エピトープの多様性、HCV感染培養細胞系の確立の困難性等により、十分な効力を有するワクチンの開発は困難な状況にある。従来の蛋白質ワクチンと異なり、DNAワクチンは特異的液性抗体のみでなく細胞性免疫を惹起することが知られており、感染予防のみでなく持続感染するウイルスに対する新しい治療法として注目されている。本研究は、HCVに持続感染したチンパンジーにHCVの免疫源性の高い領域を組み込んだプラスミドを投与し、HCVDNAワクチンのHCV感染個体における治療薬としての有用性を立証することを目的とした。DNAワクチンによるHCVの排除には強力な免疫源性が必要である。本年は、免疫誘導能が高いと考えられているE2およびNS3の領域に着目し、プロモーターとしてサイトメガロウイルスの同領域を組み込んでDNAワクチンの構築及び作成を試みた。まず、HCV感染チンパンジー2頭からウイルスRNAを抽出し、E2およびNS3領域をPCRにて増幅し、各10クローンずつのシークエンスを拾った。その中のメインのクローンをひとつに絞り、それぞれのチンパンジーに対してそれぞれのシークエンスを持ったオーダーメイドDNAワクチンを作成し、それらを大量に調整した。また、コントロールにはHCV E2を組み込まないプラスミドを用いるため、これについても同様に行った。来年度は、これを動物に投与する予定である。

干扰素治疗旨在防止慢性丙型肝炎的发展，是消除丙型肝炎病毒（HCV）的最有效方法，是消除HCVRNA的极限。许多疫苗已经用于各种病毒感染，但是关于HCV，由于中和表位的多样性以及建立HCV感染的培养细胞系的难度，具有足够疗效的疫苗的开发处于困难。与常规的蛋白质疫苗不同，DNA疫苗不仅诱导细胞介导的免疫力，而且还引起人们对持续感染的新疗法的关注，不仅可以防止感染，还可以持续感染感染的病毒。这项研究旨在施用一种质粒，该质粒将HCV的高度免疫原性区域纳入已感染HCV的黑猩猩，并证明HCV DNA疫苗在HCV感染的个体中作为治疗剂的有用性。通过DNA疫苗消除HCV需要强大的免疫系统。今年，我们专注于E2和NS3区域，这些区域被认为是高度免疫诱导的能力，并试图通过纳入巨细胞病毒作为启动子的同一区域来构建和创建DNA疫苗。首先，从两个HCV感染的黑猩猩中提取病毒RNA，并通过PCR扩增E2和NS3区域，并收集10个克隆的序列。主克隆被缩小到一个，并使用自己的序列为每个黑猩猩创建了定制的DNA疫苗，并调整了大量的DNA疫苗。此外，由于不掺入HCV E2的质粒被用作对照，因此也以相同的方式进行。明年将向动物施用。