乳酸菌をキャリアとする粘膜ワクチン系開発に関する研究

以乳酸菌为载体的粘膜疫苗系统开发研究

• 批准号: 22K07071
• 负责人: 高橋 圭太
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Gifu Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07071/
• 关键词: ワクチン; アジュバント; 乳酸菌; bacterium-like particles; Citrobacter rodetnium; 粘膜ワクチン; 細菌様粒子; DNAワクチン

本研究は、従来の注射ワクチンでの誘導が難しい粘膜免疫を誘導できるワクチン系の構築を目指した研究である。具体的には、ヒトに対する安全性が高いと考えられる乳酸菌をベクター/アジュバントとして用いる2種類の粘膜ワクチン系－1) DNAワクチン系、2) 乳酸菌由来細菌様粒子(BLP)アジュバントを用いた組換え蛋白ワクチン系－の構築を進めている。令和4年度は、経口投与と経鼻投与で誘導される抗原特異的抗体価等の比較により、投与経路の違いがこれらのワクチン系の免疫原性に及ぼす影響を検討した。1)DNAワクチン系：真核細胞内でのみEGFPを発現するプラスミドを導入した乳酸菌NZ9000株をC57BL/6マウスに経口または経鼻投与した場合のEGFP特異的抗体価を比較した。その結果、経鼻投与の場合のみEGFP特異的血中IgG、気管支肺胞洗浄液IgA、鼻腔洗浄液IgAの有意な上昇がみられた。経鼻投与群の血中IgG抗体価は、精製プラスミドの筋注群（ポジティブコントロール）の抗体価と同程度だった。2)BLPアジュバントを用いた組換え蛋白ワクチン系：マウスの病原細菌であるCitrobacter rodentiumの病原因子（Tir）をモデル抗原として使用した。TirをBLPに結合させたBLP-Tirは、経鼻投与の場合に経口投与の約1,000倍の免疫原性を示し、全身性IgGに加えて、呼吸器および腸管粘膜のIgA抗体価の上昇を誘導した。抗原/BLPの体内動態解析および粘膜関連リンパ組織のトランスクリプトーム解析の結果、投与経路による免疫原性の違いは、粘膜関連リンパ組織への抗原/BLPの到達量の違いと、それに伴う免疫関連遺伝子群の発現の強弱に起因することが明らかとなった。また、様々な乳酸菌種から調製したBLPのアジュバント効果を比較し、アジュバント効果の高いBLP、安全性の高いBLPをそれぞれ同定した。

这项研究旨在建立一种可以诱导粘膜免疫的疫苗系统，这很难用常规注射疫苗诱导。具体而言，我们目前正在开发两种类型的粘膜疫苗系统，它们使用乳酸细菌，它们被认为对人类高度安全，作为载体/佐剂 - 1）DNA疫苗系统和2）使用乳酸酸性细菌颗粒（BLP）辅助剂使用乳酸酸性细菌蛋白质系统重组蛋白疫苗系统。在2022财年，我们通过比较口服给药和鼻脏给药引起的抗原特异性抗体滴度来研究给药途径差异对这些疫苗系统免疫原性的影响。 1）DNA疫苗系统：当乳酸细菌NZ9000菌株被引入仅在真核细胞中表达EGFP的乳酸细菌NZ9000菌株时，比较EGFP特异性的抗体滴度。结果，仅在鼻腔给药中，观察到EGFP特异性血液IgG，支气管肺泡灌洗IGA和鼻腔灌洗IgA的显着增加。鼻施用组的血液IgG抗体滴度与纯化质粒的肌内内组（阳性对照）相似。 2）使用BLP辅助剂重组蛋白疫苗系统：小鼠病原细菌的致病剂（TIR）用作模型抗原。与TIR与BLP结合的BLP-TIR在鼻腔给药时的免疫原性约为1000倍，除了系统性IgG外，还会引起呼吸道和肠粘膜IgA抗体滴度的增加。与粘膜相关淋巴组织的抗原/BLP的种内分析以及转录组分析表明，由于给药途径引起的免疫原性差异是由于抗原/BLP达到的粘膜相关淋巴组织和免疫相关基因相关强度的抗原/BLP量的差异所致。此外，比较了由各种乳酸菌种类制备的BLP的辅助作用，分别鉴定出具有高辅助作用和具有高安全性的BLP的BLP。

项目成果

Effect of the administration route of the adjuvanticity of bacterium-like particles (BLPs) derived from Lactococcus lactis

给药途径对乳酸乳球菌类细菌颗粒（BLP）佐剂作用的影响

• 发表时间: 2023
• 作者: Sudo H;Tokunoh N;Tsujii A;Kawashima S;Hayakawa Y;Fukushima H;Takahashi K;Koshizuka T;Inoue N.
• 通讯作者: Inoue N.

The adjuvant effect of bacterium-like particles depends on the route of administration.

• DOI: 10.3389/fimmu.2023.1082273
• 发表时间: 2023
• 期刊: FRONTIERS IN IMMUNOLOGY
• 影响因子: 7.3
• 作者: Sudo, Haruka;Tokunoh, Nagisa;Tsujii, Ayato;Kawashima, Sarana;Hayakawa, Yuta;Fukushima, Hiroki;Takahashi, Keita;Koshizuka, Tetsuo;Inoue, Naoki
• 通讯作者: Inoue, Naoki

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