遺伝子導入滑膜細胞のシグナル伝達機構の解析―DNAアレイ法との比較検討

基因转移滑膜细胞信号转导机制分析——与DNA阵列法的对比研究

基本信息

批准号：
13877073
负责人：
宮坂信之
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

サイクリン依存性キナーゼインヒビター(CDKI)p16^<INK4a>もしくはp21^<Cipl>遺伝子導入による滑膜への細胞周期制御療法は、慢性関節リウマチ(RA)動物モデルの関節炎に著効し、滑膜組織での炎症性サイトカイン産生を抑制した。そこで、p21^<Cipl>による細胞周期制御療法の分子的基盤を明らかにするため、RA由来滑膜線維芽細胞(RSF)にp21^<Cipl>遺伝子を導入した時の種々の遺伝子発現の変化を解析した。そのために、先ず、RSFを培養し、p21^<Cipl>アデノウイルスもしくは挿入遺伝子のないアデノウイルスを感染させ、IL-1βとTNF-α刺激下ないし無刺激下において、DNAアレイにて遺伝子の発現変化を解析した。発現が変化した遺伝子の中から、RAの病態に関与すると考えられる遺伝子を選び、ノーザンブロット、ウェスタンブロット、ELISA法などで確認した。その結果、RSFにp21^<Cipl>遺伝子を導入すると、type I IL-1 recept or(IL-1R1), macrophage chemotactic protein(MCP)-1, cathepsin B, Kなどの分子の発現が減少していた。また、p21^<Cipl>を強制発現させたRSFにおいては、IL-1βとTNF-αとの刺激によるIL-6, IL-8, macrophage inflammatory protein(MIP)-3α, matrix metalloproteinase(MMP)-1, MMP-3の産生が抑制されていた。これらの分子の発現抑制には、activator protein(AP)-1の転写活性抑制やIL-1R1の発現低下が関与していると考えられた。従って、p21^<Cipl>細胞周期制御療法は、CDK活性抑制による滑膜増生の制御以外に、炎症や骨軟骨破壊に関与する分子の発現を減少させる作用を介して、関節炎治療効果を発揮すると考えられる。

通过将细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 (CDKI) p16^<INK4a> 或 p21^<Cipl> 基因引入滑膜进行细胞周期控制治疗，在类风湿性关节炎 (RA) 动物模型中对关节炎非常有效，并且滑膜组织抑制炎症细胞因子生产。因此，为了阐明p21^<Cipl>细胞周期控制治疗的分子基础，我们研究了当将p21^<Cipl>基因引入RA来源的滑膜成纤维细胞(RSF)时各种基因表达的变化。。为此，我们首先培养RSF，用p21^<Cipl>腺病毒或不插入基因的腺病毒感染它，并使用DNA阵列在IL-1β和TNF-α刺激或无刺激下测量基因表达的变化。在表达发生变化的基因中，选择被认为与RA病理有关的基因，并通过Northern blot、Western blot、ELISA等进行确认。结果，当p21^<Cipl>基因被引入RSF时，I型IL-1受体(IL-1R1)、巨噬细胞趋化蛋白(MCP)-1以及组织蛋白酶B和K等分子的表达被抑制。减少。另外，在强制表达p21^<Cip1>的RSF中，IL-6、IL-8、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-3α、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3的产生受到抑制。这些分子表达的抑制被认为与激活蛋白 (AP)-1 转录活性的抑制和 IL-1R1 表达的减少有关。因此，p21^<Cip1>细胞周期控制疗法不仅通过抑制CDK活性来控制滑膜增生，而且还通过减少参与炎症和骨软骨破坏的分子的表达来发挥对关节炎的治疗作用。