セラミドを介するアポトーシスシグナル伝達経路の分子生物学的解析析-自己免疫疾患病因解析の試み

神经酰胺介导的细胞凋亡信号转导通路的分子生物学分析——尝试分析自身免疫性疾病的发病机制

基本信息

批准号：
09877095
负责人：
宮坂信之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877095/
关键词：
アポトーシスセラミドスフィンゴミエリン Fas抗原

项目摘要

アポトーシスに関連した細胞内シグナル伝達系は部分的に明らかになりつつある。私達は既にアポトーシスのセカンドメッセンジャーであるセラミドは、ICEファミリープロテアーゼの一員であるCPP32を活性化することによって核の形態変化を誘導していることを見出した。本研究ではセラミドを介したアポトーシスシグナル伝達機構をさらに解析した。抗Fas抗体によるアポトーシスに抵抗性の変異株であるJurkatFRはセラミドによるアポトーシスにも耐性であった。ウェスタンブロットではCPP32の発現量は野生型と同程度であったが、抗Fas抗体、セラミド処理後のCPP32の限定分解、および蛍光色素を基質とした酵素活性は有意に低下していた。さらにアポトーシス調節因子であるbcl-2、bcl-x、baxの発現を検討したところ、JurkatFRでは明らかなbcl-xLの高発現を認めた。よってJurkatFRの異常はセラミド-ICE様プロテアーゼ系にあり、かつbcl-xLがこの系を抑制する可能性が示唆された。次に、アポトーシスの初期マーカーとして特徴的であるホスファチジルセリン(PS)の細胞表面への表出にセラミドが関与するかを検討した。抗Fas抗体によるPSの表出はCPP32阻害剤であるAcDEVD-CHOで抑制されたため、PS表出にはCPP32が必要であると考えられた。しかし、セラミドによるアポトーシスではPS表出はわずかであったため、PS表出にはCPP32の活性化のみでは不十分であり、スフィンゴミエリン-セラミド系以外の経路が重要であると考えられた。

与细胞凋亡相关的细胞内信号系统仅部分变得清晰。我们已经发现，细胞凋亡的第二信使神经酰胺通过激活蛋白酶 ICE 家族成员 CPP32 来诱导核形态的变化。在本研究中，我们进一步分析了神经酰胺介导的细胞凋亡信号转导机制。 JurkatFR 是一种对抗 Fas 抗体诱导的细胞凋亡具有抵抗力的突变株，也对神经酰胺诱导的细胞凋亡具有抵抗力。 Western blot结果显示，CPP32的表达水平与野生型相似，但抗Fas抗体和神经酰胺处理后CPP32的降解有限，并且以荧光染料为底物的酶活性显着降低。此外，当我们检查凋亡调节因子bcl-2、bcl-x和bax的表达时，我们发现JurkatFR明显表现出bcl-xL的高表达。因此，有人认为JurkatFR的缺陷在于神经酰胺-ICE样蛋白酶系统，而bcl-xL可能会抑制该系统。接下来，我们研究了神经酰胺是否参与细胞表面细胞凋亡的特征性早期标志物磷脂酰丝氨酸（PS）的表达。抗 Fas 抗体诱导的 PS 表达被 CPP32 抑制剂 AcDEVD-CHO 抑制，表明 CPP32 是 PS 表达所必需的。然而，在神经酰胺诱导的细胞凋亡中，PS 表达量极小，这表明单独激活 CPP32 不足以表达 PS，除了鞘磷脂-神经酰胺系统外，其他途径也很重要。