p27^<Kip1>新規分子種の同定とがん抑制因子としての機能解明

p27^<Kip1>新分子种类的鉴定及其抑癌功能的阐明

• 批准号: 14026038
• 负责人: 平野 勝也
• 金额: $ 2.62万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026038/
• 关键词: サイクリン依存性キナーゼ阻害因子; 核移行シグナル; アイソフォーム; 細胞周期; 転写; 遺伝子; プロモーター; 接触抑制

細胞間接触により増殖を停止したブタ大動脈由来培養内皮細胞からサイクリン依存性キナーゼ阻害因子p27^<Kip1>の新たなアイソフォーム(p27^<Kip1R>)をクローニングした。p27^<Kip1R>のがん抑制因子としての機能を、細胞および個体レベルで明らかにすることを目的として、核移行、細胞周期制御及び分解抵抗性に関わる構造を明らかにした。また、自然高血圧発症ラット(SHR)と正常ラットの大動脈における2つのアイソフォームの発現解析から、組織増殖性とアイソフォーム発現の相関を、個体レベルで明らかにした。1.p27^<Kip1R>は、領域153-168が有意な核移行に必要な配列であることが明らかになった。この領域には塩基性アミノ酸は一残基(K168)しか含まれない。不足する塩基性アミノ酸に代わり疎水性アミノ酸が機能を果たすという点で非典型的な2分裂型核移行シグナルであることを明らかにした。2.GFP発現系を用いて細胞増殖に及ぼす影響を解析し、p27^<Kip1R>の増殖抑制作用を明らかにした。増殖抑制には、p27^<Kip1>と共通のN末端領域が必要である。3.6週齢SHRの大動脈にはp27^<Kip1>が、正常ラットではp27^<Kip1R>が、主なアイソフォームとして発現する。週齢を重ねると、SHRにおいてもp27^<Kip1R>発現が優位になる。正常ラット大動脈を培養するとp27^<Kip1R>が消失し、p27^<Kip1>が主に発現する。個体レベルで、組織増殖性とp27^<Kip1R>発現に逆相関が示唆された。4.Kip1遺伝子全長を決定した。p27^<Kip1R>特異的コード領域がエキソン3に含まれることを明らかにした。プロモーター活性が、細胞間接触により亢進することを明らかにした。この活性増加には、翻訳開始点より上流2000-2350bpの領域が必要であった。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27^<kip1>（p27^<kip1r>）的新型亚型是从源自猪主动脉的培养的内皮细胞中克隆的，该细胞源自猪主动脉，该细胞通过细胞细胞接触阻止了它们的增殖。为了阐明p27^<kip1r>作为细胞和个体水平的癌症抑制剂的功能，我们阐明了核易位，细胞周期调节和降解抗性所涉及的结构。此外，通过分析自发性高血压发作大鼠（SHRS）和正常大鼠的主动脉中两种同工型的表达，在个体水平上揭示了组织增殖性与同工型表达之间的相关性。 1.P27^<kip1r>已证明是明显的核易位所需的序列。该区域仅包含一个残基（K168）。已经发现疏水性氨基酸是非典型的二纤维化核易位信号，因为它们用疏水性氨基酸的功能代替了缺乏的碱性氨基酸。 2。使用GFP表达系统分析了对细胞增殖的影响，并揭示了p27^<kip1r>的抑制作用。为了抑制增殖，需要具有p27^<kip1>的常见N末端区域。 p27^<kip1>在3.6周大的主动脉中表达，p27^<kip1r>表示为正常大鼠的主要同工型。随着年龄的增长，p27^<kip1r>表达在SHR中也占主导地位。当培养正常大鼠主动脉时，p27^<kip1r>消失，p27^<kip1>主要表示。在单个水平上，组织增殖与p27^<kip1r>表达之间提出了反相关。 4。确定KIP1基因的总长度。据表明，p27^<kip1r>特异性编码区包含在外显子3中。发现通过细胞 - 细胞接触增加了启动子活性。这种增加的活动需要从翻译起始点上游的2000-2350 bp区域。

项目成果

Hirano K, Zeng Y, Hirano M, Nishismura J, Kanaide H: "Sequence requirement for nuclear localization and growth inhibition of p27^<Kip1R>, a degradation-resistant isoform of p27^<Kip1>"J Cell Biochem. (in press).

Hirano K、Zeng Y、Hirano M、Nishismura J、Kanaide H：“p27^<Kip1R> 的核定位和生长抑制的序列要求，p27^<Kip1R> 是 p27^<Kip1> 的一种抗降解亚型”J Cell Biochem。