p27^<Kip1>新規分子種の同定とがん抑制因子としての機能解明

p27^<Kip1>新分子种类的鉴定及其抑癌功能的阐明

• 批准号: 14026038
• 负责人: 平野 勝也
• 金额: $ 2.62万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026038/
• 关键词: サイクリン依存性キナーゼ阻害因子; 核移行シグナル; アイソフォーム; 細胞周期; 転写; 遺伝子; プロモーター; 接触抑制

細胞間接触により増殖を停止したブタ大動脈由来培養内皮細胞からサイクリン依存性キナーゼ阻害因子p27^<Kip1>の新たなアイソフォーム(p27^<Kip1R>)をクローニングした。p27^<Kip1R>のがん抑制因子としての機能を、細胞および個体レベルで明らかにすることを目的として、核移行、細胞周期制御及び分解抵抗性に関わる構造を明らかにした。また、自然高血圧発症ラット(SHR)と正常ラットの大動脈における2つのアイソフォームの発現解析から、組織増殖性とアイソフォーム発現の相関を、個体レベルで明らかにした。1.p27^<Kip1R>は、領域153-168が有意な核移行に必要な配列であることが明らかになった。この領域には塩基性アミノ酸は一残基(K168)しか含まれない。不足する塩基性アミノ酸に代わり疎水性アミノ酸が機能を果たすという点で非典型的な2分裂型核移行シグナルであることを明らかにした。2.GFP発現系を用いて細胞増殖に及ぼす影響を解析し、p27^<Kip1R>の増殖抑制作用を明らかにした。増殖抑制には、p27^<Kip1>と共通のN末端領域が必要である。3.6週齢SHRの大動脈にはp27^<Kip1>が、正常ラットではp27^<Kip1R>が、主なアイソフォームとして発現する。週齢を重ねると、SHRにおいてもp27^<Kip1R>発現が優位になる。正常ラット大動脈を培養するとp27^<Kip1R>が消失し、p27^<Kip1>が主に発現する。個体レベルで、組織増殖性とp27^<Kip1R>発現に逆相関が示唆された。4.Kip1遺伝子全長を決定した。p27^<Kip1R>特異的コード領域がエキソン3に含まれることを明らかにした。プロモーター活性が、細胞間接触により亢進することを明らかにした。この活性増加には、翻訳開始点より上流2000-2350bpの領域が必要であった。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p27^<Kip1> (p27^<Kip1R>) 的新亚型是从培养的猪主动脉来源的内皮细胞中克隆出来的，这些细胞的增殖因细胞间接触而停止。为了在细胞和个体水平上阐明p27^<Kip1R>作为肿瘤抑制因子的功能，我们阐明了涉及核易位、细胞周期控制和抗降解性的结构。此外，通过分析自发性高血压大鼠（SHR）和正常大鼠主动脉中两种异构体的表达，我们阐明了个体水平上组织增殖与异构体表达之间的相关性。 1. 揭示p27^<Kip1R>的153-168区域是重要核输入所需的序列。该区域仅包含一个碱性氨基酸残基（K168）。我们发现这是一种非典型的二元裂变型核输入信号，因为疏水性氨基酸代替了缺失的碱性氨基酸。 2.利用GFP表达系统分析了p27^<Kip1R>对细胞增殖的影响，明确了p27^<Kip1R>的生长抑制作用。 p27^<Kip1> 共有的 N 末端区域是生长抑制所必需的。 p27^<Kip1>在3.6周龄SHR的主动脉中表达为主要亚型，p27^<Kip1R>在正常大鼠中表达。随着年龄的增长，p27^<Kip1R> 表达在 SHR 中也占主导地位。正常大鼠主动脉培养时，p27^<Kip1R>消失，主要表达p27^<Kip1>。在个体水平上，组织增殖与p27^<Kip1R>表达之间存在负相关。 4.确定Kip1基因全长。结果表明，p27^<Kip1R> 特异性编码区包含在外显子 3 中。据揭示，启动子活性通过细胞与细胞接触而增强。这种活性的增加需要翻译起始位点上游 2000-2350 bp 的区域。

项目成果

Hirano K, Zeng Y, Hirano M, Nishismura J, Kanaide H: "Sequence requirement for nuclear localization and growth inhibition of p27^<Kip1R>, a degradation-resistant isoform of p27^<Kip1>"J Cell Biochem. (in press).

Hirano K、Zeng Y、Hirano M、Nishismura J、Kanaide H：“p27^<Kip1R> 的核定位和生长抑制的序列要求，p27^<Kip1R> 是 p27^<Kip1> 的一种抗降解亚型”J Cell Biochem。