血球系以外の組織におけるチロシンキナーゼSykの機能解析

血细胞以外组织中酪氨酸激酶Syk的功能分析

• 批准号: 13780506
• 负责人: 定 清直
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780506/
• 关键词: 細胞内情報伝達機構; 蛋白質チロシンリン酸化反応; 蛋白質チロシンリン酸化酵素; アダプター蛋白質; Syk; 3BP2

昨年の成果に基づき、チロシンキナーゼSykの機能解析を継続した。1.標的分子の同定と機能解析:昨年度Syk会合蛋白質の一つとして酸化ストレスにより活性化するp21-activated protein kinase (γ-PAK)を同定した。本年度は、非血液細胞を用いて浸透圧と酸化ストレスによるシグナル伝達系路におけるPAKとSykの機能について解析を行った。PAK-Syk会合がSykのキナーゼ活性を正に制御し、細胞内局在変化や下流のJNK活性を刺激していることを見出した(投稿中)。さらにSykの基質であるRING型ユビキチン・リガーゼc-CblによるチロシンキナーゼLynのユビキチン化とキナーゼ活性のダウン・レギュレーションを見出した(投稿中)。2.新規Syk標的分子3BP2の機能解析:昨年度新規Syk標的分子として同定した3BP2は他のグループによりヒトの遺伝疾患ケルビン症の原因遺伝子であり顎骨の破骨細胞の機能異常に関わることが報告された(Ueki, et al. Nat. Genet.2001)。本年度は3BP2がマスト細胞の抗原による活性化を正に制御する分子であることを報告した(Sada, et al. Blood 2002)。アレルギー反応に関わるマスト細胞において3BP2は抗原刺激による細胞内カルシウムイオン濃度上昇と脱顆粒反応を制御する重要な因子であることが見出され、その制御がアレルギー疾患の治療に応用出来る可能性が明らかとなった。Sykによる3BP2のリン酸化部位としてチロシン174、183、446を同定し、446のチロシンリン酸化がチロシンキナーゼLynとの会合に必須であることを見出した(投稿中)。3.遺伝子治療の可能性の探究:Sykの基質であるCbl/Cbl-bのアミノ末端に細胞膜局在配列を付加したキメラ分子を作成し、細胞に導入することにより癌細胞の増殖における作用を解析した。血液系のマスト細胞では抗原受容体とチロシンキナーゼのユビキチン化の増強が見出され、抗免疫・抗腫瘍効果をもつ遺伝子治療への可能性が見出されたが、非血液系の細胞では著明な影響が見られなかった。

基于去年的结果，我们继续对酪氨酸激酶Syk进行功能分析。 1.目标分子的鉴定和功能分析：去年，我们鉴定了氧化应激激活的p21激活蛋白激酶（γ-PAK）作为Syk相关蛋白之一。今年，我们利用非血细胞分析了PAK和Syk在渗透压和氧化应激诱导的信号转导通路中的功能。我们发现 PAK-Syk 关联正向调节 Syk 的激酶活性，刺激细胞内定位和下游 JNK 活性的变化（目前已提交）。此外，我们发现RING型泛素连接酶c-Cbl（Syk的底物）下调酪氨酸激酶Lyn的泛素化和激酶活性（目前已提交）。 2.新的Syk靶分子3BP2的功能分析：3BP2是去年被鉴定为新的Syk靶分子，已被另一个研究小组报道为人类遗传病开尔文综合征的致病基因，并参与功能性遗传病的研究。颌骨中的破骨细胞异常（Ueki, et al. Nat. Genet. 2001）。今年，我们报道了 3BP2 是一种能够积极控制抗原诱导的肥大细胞激活的分子 (Sada, et al. Blood 2002)。在参与过敏反应的肥大细胞中，3BP2被发现是控制抗原刺激引起的细胞内钙离子浓度升高和脱颗粒反应的重要因子，并且明确其调节可能适用于过敏性疾病的治疗。它变成了。我们通过 Syk 鉴定出酪氨酸 174、183 和 446 为 3BP2 的磷酸化位点，并发现 446 处的酪氨酸磷酸化对于与酪氨酸激酶 Lyn 的关联至关重要（已提交）。 3. 探索基因治疗的可能性：通过创建在Syk的底物Cbl/Cbl-b的氨基末端添加细胞膜定位序列的嵌合分子，并将其引入细胞中，我们希望能够分析了对癌细胞增殖的影响。在血液相关的肥大细胞中发现抗原受体和酪氨酸激酶的泛素化增强，表明基因治疗具有抗免疫和抗肿瘤作用的可能性；尚未看到明显的效果。

项目成果

定 清直: "マスト細胞におけるアダプター蛋白質3BP2の役割"アレルギー科. 15(3)(in press). (2003)

Kiyonao Sada：“肥大细胞中接头蛋白 3BP2 的作用”15(3)（出版中）。

Sada, K.: "SH2 domain-mediated targeting, but not localization, of Syk in the plasma membrane is critical for FcεRI signaling pathway"Blood. 97・5. 1352-1359 (2001)

Sada, K.：“质膜中 Syk 的 SH2 结构域介导的靶向而非定位对于 FcεRI 信号通路至关重要”Blood.97·5。

Gao, S.: "A novel phenoxazine derivative suppresses surface IgM expression in DT40 B cell line"Brit. J. Pharmacol.. 137(6). 749-755 (2002)

高，S.：“一种新型吩恶嗪衍生物抑制 DT40 B 细胞系中的表面 IgM 表达”Brit。

He, J.: "Syk is required for p38 activation and G2/M arrest in b cells exposed to oxidative stress"Antioxidnants & Redox Signaling. (in press). (2002)

He, J.：“暴露于氧化应激的 b 细胞中 p38 激活和 G2/M 期停滞需要 Syk”