ホヤの原始的な中枢神経系発生過程における細胞単位の遺伝子発現プロファイル解析-脳発生機構の進化を解析する端緒として-

海鞘原始中枢神经系统发育过程中细胞基因表达谱分析 - 作为分析大脑发育机制进化的起点 -

基本信息

批准号：
13202002
负责人：
山本博章
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

原索動物ホヤのオタマジャクシ幼生中枢神経系および脳胞内感覚器を形成する細胞全てについて、細胞ごとのcDNAライブラリーを作製し、その網羅的な発現プロファイルを作製すること、さらにそこにいたる発生段階の異なる胚においても当該プロファイルを作製し、空間的また時間軸に沿った発生プログラム解析を可能にすることを、本研究は大きな目標としている。端緒として、オタマジャクシ幼生の脳内に分化するotolith(平行器)とocellus(眼点)を構祓する2つの色素細胞それぞれを、その色素を目印にして分離し、そこからGDNAライブラリーを作成しその解析を行うことにした。すでに作製していた当該ライブラリーのクオリティーが、配列解析に満足のいく結果を示さなかったため、再度方法を変えて調製したところ、平行器および眼点色素細胞からそれぞれ2.57×10^8,4.52×10^6のcomplexityを持つcDNAライブラリーが得られた。それぞれから現在のところ約2000のファージクローンをピックアップし、そのインサートをサブクローニング後、配列決定を行らた。これらのライブラリーは、生体の特定の1細胞における遺伝子発現プロファイル解析を可能とすることがもっとも大きな特徴である。解析数がまだ十分ではないものの、これまでのところこれらのライブラリーは、、個体や組織全体に由来するライブラリーに比べて、ハウスキーピング遺伝子を含む割合が少なく、重複して出現する配列が少ない等々、特徴あるプロファイルが明らかになってきた。解析されたクローンの一部については、in situ hybridization法によってその発現領域を解析した。その結果、上記二つの色素細胞以外にも脳胞全体で発現するもの、幼生前側で特殊な発現をするもの等々興味ある結果が得られた。

这项研究的主要目的是为每个细胞为每个细胞创建cDNA库，这些细胞形成the or的中枢神经系统和Chordate松鼠中的感觉器官，并为它们创建详尽的表达能力，以及在不同的发育阶段的胚胎，从而可以进行空间和基于时间的开发程序分析。作为起点，我们分离了两个色素细胞中的每个细胞中的每个细胞，这些细胞驱除耳石（平行）和Ocellus（眼斑），将分化为tadpole幼虫的大脑，使用色素作为标记，然后从那里创建GDNA文库并进行分析。已经制备的库的质量在序列分析中没有显示出令人满意的结果，因此该方法再次更改以制备cDNA库的复杂性为2.57×10^8和4.52×10^6，分别从平行和眼斑色素细胞中。目前从每个阶段中挑选了大约2000个噬菌体克隆，并将插入物取代并测序。这些文库的最重要特征是它们允许分析活生物体的特定细胞中的基因表达谱。尽管到目前为止，尽管分析的数量还不够，但是这些文库揭示了独特的概况，例如，比例较小的管家基因比例较少，而重叠序列比从个人和组织中得出的文库少。对于某些分析的克隆，通过原位杂交分析表达区域。结果，除了上面提到的两个色素细胞外，还有有趣的结果，例如在整个脑囊泡中表达的结果，以及在前幼虫中表现出特殊表达的结果。