部分ペプチドを用いた蛋白質・蛋白質相互作用の解析

使用部分肽分析蛋白质-蛋白质相互作用

基本信息

批准号：
13014204
负责人：
若松馨
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014204/
关键词：
G蛋白質レセプター部分ペプチドマガイニンバイセル活性化

项目摘要

1.ユビキチン融合蛋白質を用いた安定同位体ラベルペプチド発現系の発現効率を上げることに成功した。マストパランXについては、融合蛋白質全体のcodonusageを大腸菌に合わせること、mRNAの分解が少ないBL21 star(DE3)ホストを用いること、大腸菌の破砕の段階から変性剤を加えることによって、調製できる量が7倍に向上した。マガイニン2については通常のM9培地では全く発現しなかったが、BL21/pLysSホストを用いること、CHL培地を用いることによって発現できるようになった。2.我々の作成したm4レセプターの部分ペプチド[m4I3C(14)]が三量体G蛋白質の一種であるGiを選択的かつ強力に活性化できることを明らかにした。m4I3C(14)に似たペプチドであるM-IIIはGoだけでなくGqも活性化し特異性が低かったが、m4I3C(14)によるGqの活性化は弱かった。また、従来三量体G蛋白質の活性化に頻用されていたマストパランは細胞膜の三量体G蛋白質だけでなく低分子量G蛋白質も活性化したが、m4I3C(14)は細胞膜の三量体G蛋白質を特異的に活性化できることがわかった。3.bicelleについて光散乱とX線散乱によるcharacterizationを行った。DMPCとCHAPSOで作るbicelleはq値(DMPC/CHAPSOのモル比)が1.2以下では当初予想されていたdiskの形状を取っていることが確認されたが、qが1.5以上ではdiskではなく長いヒモの形状を取っていることが明らかになった。また、q=1のbicelleではdiskの周辺部だけでなくbilayer部分にもCHAPSOが存在していることが明らかとなった。

1. 我们成功地利用泛素融合蛋白提高了稳定同位素标记肽表达系统的表达效率。对于Mastoparan 有所改善。 Magainin 2在正常M9培养基中根本不表达，但通过使用BL21/pLysS宿主和CHL培养基可以表达它。 2.我们发现，我们创建的m4受体部分肽[m4I3C(14)]可以选择性地强烈激活Gi（一种三聚体G蛋白）。 M-III是一种与m4I3C相似的肽(14)，不仅激活Go，还激活Gq，且特异性低，但m4I3C(14)对Gq的激活较弱。此外，传统上经常用于激活三聚体 G 蛋白的 mastoparan 不仅可以激活细胞膜中的三聚体 G 蛋白，还可以激活低分子量 G 蛋白，而 m4I3C (14) 则不能激活细胞膜中的三聚体 G 蛋白。发现能够特异性激活。 3.Bicelle通过光散射和X射线散射进行表征。经证实，当q值（DMPC/CHAPSO摩尔比）小于1.2时，由DMPC和CHAPSO制成的bicelle呈现出最初预期的圆盘形状，但当q值等于或大于1.5时，它变成长绳而不是很明显，它采用了磁盘的形式。另外，在q=1的bicelle中，很明显CHAPSO不仅存在于盘的外围区域，而且还存在于双层区域。